24小时热门版块排行榜    

汕头大学海洋科学、生物学、生物与医药等3个专业接受调剂
查看: 5766  |  回复: 28
【悬赏金币】回答本帖问题,作者友谊无限将赠送您 3 个金币

友谊无限

金虫 (小有名气)

[求助] 如何正确计算药代中药物的提取回收率?

大家好!
   我正在做药代动力学中药物的提取回收率,看了很多文献,但提取回收率的做法不一,所以想请教大家给予正确的做法。
   我是这样做提取回收率的:1.取一个浓度的标准溶液(比如8ug/ml的标准液)100ul,加入空白血浆0.5ml,再加内标50ul,加少量磷酸后,涡旋混匀。然后加入3ml的乙酸乙酯进行萃取,涡旋3min,离心(4000r/min)10min,取一定量的上清液,在45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A1、A2,R1=A1/A2。   2. 另取8ug/ml的标准液100ul,再加内标50ul,混匀后于45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A3、A4,R2=A3/A4 。
   提取回收率的计算如下:
   方法一:R=A1/A3 (直接用药物峰面积之比计算)
   方法二:R=R1/R2  (用药物与内标的比值计算)
   请教各位做药代动力学的朋友,我所做的药物提取回收率方法是否正确?
   计算提取回收率是应该用方法一,还是方法二?
   我参考了许多文献,但做法不一,所以希望大家能给予帮助,非常感谢!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

药代动力学…… 摇曳的星星 问题收集

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

努力追求更好!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lwfazyy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

友谊无限(金币+2): 2011-09-30 14:24:32
方法学考核时要考核提取回收率、过程有效率和基质效应,且待测物和内标均要考核。
做法举例:
1  取标准溶液(80ng/ml)10ul,+空白血浆500ul,+内标(50ng/ml)10ul,混匀,萃取,离心,挥干,以100ul流动相复溶,取20ul进样,得待测物和内标峰面积分别为A1和B1(待测物和内标的理论浓度分别为8ng/ml和5ng/ml)
2  取500ul空白血浆,萃取,离心,挥干,流动相配制含待测物和内标的理论浓度分别为8ng/ml和5ng/ml的溶液150ul复溶之,取20ul进样,得待测物和内标的峰面积分别为A2和B2
3 流动相配制含待测物和内标的理论浓度分别为8ng/ml和5ng/ml的溶液150ul,取20ul进样,得待测物和内标峰面积分别为A3和B3
计算:
提取回收率:待测物=A1/A2  内标=B1/B2  同类基质下的比较,表征加样 回收率大小
基质效应:待测物=A2/A3  内标=B2/B3  不同基质下,同样的理论浓度比较,表征基质对测定的影响程度,离子增强或离子抑制程度
过程有效率:待测物=A1/A3 内标=B2/B3  整个方法的总体效率

3方面结合评价一个方法的可靠与否。低、中、高浓度都要以上述办法评价。

以上为我们承接I期临床药代动力学或生物等效性研究时采取的方法学验证办法。

从现在的注册审查要求来看,回收率不一定要多高,能满足测定灵敏度要求足矣;基质效应要小,我们实验室的标准为90-110%,实践证明,基质效应大时往往测样量大时carry over明显,测定结果不可靠。

啰嗦半天,希望有所帮助
没有到不了的明天!
18楼2011-09-28 20:09:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihui5456

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1  取标准溶液(100ng/ml)10ul,+空白血浆490ul,+内标(50ng/ml)10ul,加入1Ml有机溶剂,混匀,萃取,离心,取0.8ml上清,挥干,以100ul流动相复溶,取20ul进样,得待测物和内标峰面积分别为A1和B1(待测物和内标的理论浓度分别为2ng/ml和1ng/ml)
2  取490ul空白血浆+10ul标准溶液稀释用溶剂+10ul内标溶解用溶剂,加入1Ml有机溶剂萃取,离心,取0.8ml上清,挥干,流动相配制含待测物和内标的理论浓度分别为2ng/ml和1ng/ml的溶液100ul复溶之,取20ul进样,得待测物和内标的峰面积分别为A2和B2
计算:
提取回收率:待测物=(A1/A2)*(1/0.8)*100%  内标=(B1/B2)*(1/0.8)*100%该方法能正确反映溶剂的萃取效率极其整个操作中的提取效率。其中(1/0.8)为提取系数,是根据“加入1Ml有机溶剂,取0.8ml上清”计算的。
为了更好的模拟生物情况,一般要求加入的标准溶液和内标体积尽可能的小,但是过小的体积也带来更大的误差。对于用水或者甲醇:水=1:1配置的溶液,可以适当加大体积,可以适当控制在血浆体积的10%以内。而对于完全的乙腈、甲醇溶剂,建议控制在1/50以内,或者在加入血浆前挥干。
Iris
25楼2012-05-31 11:47:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (初入文坛)


wtf66(金币+1): 谢谢参与 2011-09-26 21:27:22
友谊无限(金币+1): 2011-10-17 17:31:27
本帖仅楼主可见
10楼2011-09-25 22:18:02
已阅   申请PhEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

lwfazyy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

友谊无限(金币+1): 2011-10-31 09:52:54
补充说明一句,内标回收率稳定也很重要。
高中低浓度回收率一致性也很重要。例如,低浓度回收率110%,中浓度90%,高浓度90%,我认为方法也不太完美。

总之,都重要都重要
没有到不了的明天!
19楼2011-09-28 20:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

兰黛诗

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

友谊无限(金币+3): 2011-09-24 16:41:35
那你的标曲如何做?
直接用A1/A2吧
方法一是没道理的,根本体现不出内标的作用
方法二虽然体现了内标的作用,但是太繁琐了吧,没有必要
2楼2011-09-24 14:37:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

友谊无限

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 兰黛诗 at 2011-09-24 14:37:08:
那你的标曲如何做?
直接用A1/A2吧
方法一是没道理的,根本体现不出内标的作用
方法二虽然体现了内标的作用,但是太繁琐了吧,没有必要

感谢指导!  我的标曲是用A1/A2做的,如果方法一、方法二都不合理,请问如何计算才正确?  谢谢!
努力追求更好!
3楼2011-09-24 16:44:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兰黛诗

金虫 (小有名气)

不用客气,我做的回收率是将加样回收率的样品直接进样,得到样品与内标的峰面积比值,带入标准曲线,计算样品含量,将计算所得含量比加样量。
4楼2011-09-24 17:15:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

友谊无限

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 兰黛诗 at 2011-09-24 17:15:57:
不用客气,我做的回收率是将加样回收率的样品直接进样,得到样品与内标的峰面积比值,带入标准曲线,计算样品含量,将计算所得含量比加样量。

楼主算的好像是方法回收率,因为药代测定中有方法回收率和提取回收率,二者的做法有差别。
努力追求更好!
5楼2011-09-24 20:41:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxq0808

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

友谊无限(金币+1): 2011-09-25 13:03:47
我们一般是用方法二
6楼2011-09-25 00:16:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈林霖

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

友谊无限(金币+2): 2011-09-25 17:50:43
方法2是错误的,用这个方法无论样品和内标的提取率均为50%,或均为100%,算出的回收率都是一样的,步骤1的内标应在提取后加入
7楼2011-09-25 14:52:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

友谊无限

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 陈林霖 at 2011-09-25 14:52:55:
方法2是错误的,用这个方法无论样品和内标的提取率均为50%,或均为100%,算出的回收率都是一样的,步骤1的内标应在提取后加入

哦,我现在都有点糊涂了,呵呵!   如果方法2是错的,请问正确的方法要怎么做呢?
   如果内标是在提取后加入,那好像内标的作用就不太大了,请赐教! 谢谢!
努力追求更好!
8楼2011-09-25 17:54:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈林霖

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 友谊无限 at 2011-09-25 17:54:40:
哦,我现在都有点糊涂了,呵呵!   如果方法2是错的,请问正确的方法要怎么做呢?
   如果内标是在提取后加入,那好像内标的作用就不太大了,请赐教! 谢谢!

这个问题也困扰我很长时间,我上面也说错了,步骤1,2都是没问题的,但计算方法二我并不认同。大部分文献采用的是方法一。这个是FDA发布的指导原则,第5 页http://wenku.baidu.com/view/f36635d1240c844769eaee00.html
9楼2011-09-25 18:41:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 友谊无限 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程287求调剂 +4 @阿松 2025-04-03 4/200 2025-04-03 17:16 by 4224
[考研] 292求调剂 +3 2025417 2025-04-03 3/150 2025-04-03 17:00 by cqjd0301
[考研] 086000生物与医药调剂 +3 生物与医药求收� 2025-04-03 3/150 2025-04-03 16:45 by siwuhen
[考研] 300求调剂 +4 徐业凡 2025-04-01 4/200 2025-04-03 16:31 by deli000000
[考研] 085601找调剂院校 +7 forever.C 2025-04-03 8/400 2025-04-03 15:20 by 川哥v5
[考研] 278求调剂 +9 202103847 2025-04-02 9/450 2025-04-03 14:57 by fmesaito
[考研] 一志愿东南大学材料学硕,总分342分求调剂 +11 好想读研啊啊 2025-03-31 11/550 2025-04-03 13:24 by 诗与自由
[考研] 334求调剂 +5 13199189129 2025-03-30 5/250 2025-04-02 15:41 by lfhuang
[考研] 求调剂一志愿东华大学材料与化工268 +5 泫弟弟啊 2025-04-01 5/250 2025-04-02 15:29 by nanaliuyun
[考研] 江苏海洋大学招研究生,导师人很好 +3 江苏海洋大学招� 2025-04-02 4/200 2025-04-02 14:12 by C30714042
[考研] 0832食品科学求调剂 +5 乌龙茶大人 2025-03-29 8/400 2025-04-02 07:30 by huaeyt
[考研] 318求调剂 +7 一问三不know 2025-04-01 7/350 2025-04-02 07:08 by JourneyLucky
[考研] 270求调剂 +4 里昂 s 2025-04-01 4/200 2025-04-01 20:39 by 呼大怪
[考研] 307求调剂 +5 王世宁 2025-04-01 5/250 2025-04-01 19:10 by nwpu315
[考研] 调剂调剂 +3 。。你呢 2025-04-01 3/150 2025-04-01 18:28 by 小木虫于
[考研] 招08调剂 +16 laoshidan 2025-03-30 21/1050 2025-04-01 09:42 by 及时行乐fan
[考研] 求调剂 +9 桑榆子 2025-03-28 9/450 2025-04-01 09:19 by nanaliuyun
[考研] 311求调剂 +3 shiho111 2025-03-31 3/150 2025-03-31 20:51 by Iveryant
[考研] 302求调剂 +12 hqq100100. 2025-03-30 12/600 2025-03-31 19:08 by pswait
[考研] 机械专硕297调剂 +4 李lfff 2025-03-30 6/300 2025-03-30 20:12 by 阿健1234
信息提示
请填处理意见
复试调剂复试调剂
复试调剂二维码获取复试 & 调剂指南!微信扫一扫
商务合作商务合作
商务合作二维码商务合作咨询微信扫一扫(备注:商务合作)
学术干货学术干货
学术干货二维码微信扫一扫了解最新学术干货
论文辅导论文辅导
论文辅导二维码微信扫一扫添加老师,免费咨询
师资招募师资招募