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汕头大学海洋科学、生物学、生物与医药等3个专业接受调剂
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友谊无限

金虫 (小有名气)

[求助] 如何正确计算药代中药物的提取回收率?

大家好!
   我正在做药代动力学中药物的提取回收率,看了很多文献,但提取回收率的做法不一,所以想请教大家给予正确的做法。
   我是这样做提取回收率的:1.取一个浓度的标准溶液(比如8ug/ml的标准液)100ul,加入空白血浆0.5ml,再加内标50ul,加少量磷酸后,涡旋混匀。然后加入3ml的乙酸乙酯进行萃取,涡旋3min,离心(4000r/min)10min,取一定量的上清液,在45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A1、A2,R1=A1/A2。   2. 另取8ug/ml的标准液100ul,再加内标50ul,混匀后于45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A3、A4,R2=A3/A4 。
   提取回收率的计算如下:
   方法一:R=A1/A3 (直接用药物峰面积之比计算)
   方法二:R=R1/R2  (用药物与内标的比值计算)
   请教各位做药代动力学的朋友,我所做的药物提取回收率方法是否正确?
   计算提取回收率是应该用方法一,还是方法二?
   我参考了许多文献,但做法不一,所以希望大家能给予帮助,非常感谢!
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lwfazyy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

友谊无限(金币+2): 2011-09-30 14:24:32
方法学考核时要考核提取回收率、过程有效率和基质效应,且待测物和内标均要考核。
做法举例:
1  取标准溶液(80ng/ml)10ul,+空白血浆500ul,+内标(50ng/ml)10ul,混匀,萃取,离心,挥干,以100ul流动相复溶,取20ul进样,得待测物和内标峰面积分别为A1和B1(待测物和内标的理论浓度分别为8ng/ml和5ng/ml)
2  取500ul空白血浆,萃取,离心,挥干,流动相配制含待测物和内标的理论浓度分别为8ng/ml和5ng/ml的溶液150ul复溶之,取20ul进样,得待测物和内标的峰面积分别为A2和B2
3 流动相配制含待测物和内标的理论浓度分别为8ng/ml和5ng/ml的溶液150ul,取20ul进样,得待测物和内标峰面积分别为A3和B3
计算:
提取回收率:待测物=A1/A2  内标=B1/B2  同类基质下的比较,表征加样 回收率大小
基质效应:待测物=A2/A3  内标=B2/B3  不同基质下,同样的理论浓度比较,表征基质对测定的影响程度,离子增强或离子抑制程度
过程有效率:待测物=A1/A3 内标=B2/B3  整个方法的总体效率

3方面结合评价一个方法的可靠与否。低、中、高浓度都要以上述办法评价。

以上为我们承接I期临床药代动力学或生物等效性研究时采取的方法学验证办法。

从现在的注册审查要求来看,回收率不一定要多高,能满足测定灵敏度要求足矣;基质效应要小,我们实验室的标准为90-110%,实践证明,基质效应大时往往测样量大时carry over明显,测定结果不可靠。

啰嗦半天,希望有所帮助
没有到不了的明天!
18楼2011-09-28 20:09:09
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兰黛诗

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

友谊无限(金币+3): 2011-09-24 16:41:35
那你的标曲如何做?
直接用A1/A2吧
方法一是没道理的,根本体现不出内标的作用
方法二虽然体现了内标的作用,但是太繁琐了吧,没有必要
2楼2011-09-24 14:37:08
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友谊无限

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 兰黛诗 at 2011-09-24 14:37:08:
那你的标曲如何做?
直接用A1/A2吧
方法一是没道理的,根本体现不出内标的作用
方法二虽然体现了内标的作用,但是太繁琐了吧,没有必要

感谢指导!  我的标曲是用A1/A2做的,如果方法一、方法二都不合理,请问如何计算才正确?  谢谢!
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3楼2011-09-24 16:44:18
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兰黛诗

金虫 (小有名气)

不用客气,我做的回收率是将加样回收率的样品直接进样,得到样品与内标的峰面积比值,带入标准曲线,计算样品含量,将计算所得含量比加样量。
4楼2011-09-24 17:15:57
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