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友谊无限

金虫 (小有名气)

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[求助] 如何正确计算药代中药物的提取回收率？

大家好！
我正在做药代动力学中药物的提取回收率，看了很多文献，但提取回收率的做法不一，所以想请教大家给予正确的做法。
我是这样做提取回收率的：1.取一个浓度的标准溶液（比如8ug/ml的标准液）100ul，加入空白血浆0.5ml，再加内标50ul，加少量磷酸后，涡旋混匀。然后加入3ml的乙酸乙酯进行萃取，涡旋3min，离心（4000r/min）10min，取一定量的上清液，在45°C水浴中氮气流吹干，残渣用流动相150ul复溶，高速离心后，进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A1、A2，R1=A1/A2。 2. 另取8ug/ml的标准液100ul，再加内标50ul，混匀后于45°C水浴中氮气流吹干，残渣用流动相150ul复溶，高速离心后，进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A3、A4，R2=A3/A4 。
提取回收率的计算如下：
方法一：R=A1/A3 （直接用药物峰面积之比计算）
方法二：R=R1/R2 （用药物与内标的比值计算）
请教各位做药代动力学的朋友，我所做的药物提取回收率方法是否正确？
计算提取回收率是应该用方法一，还是方法二？
我参考了许多文献，但做法不一，所以希望大家能给予帮助，非常感谢！

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努力追求更好！

1楼2011-09-24 13:38:15

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lwfazyy

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

友谊无限(金币+2): 2011-09-30 14:24:32

方法学考核时要考核提取回收率、过程有效率和基质效应，且待测物和内标均要考核。
做法举例：
1  取标准溶液（80ng/ml）10ul，+空白血浆500ul，+内标（50ng/ml）10ul，混匀，萃取，离心，挥干，以100ul流动相复溶，取20ul进样，得待测物和内标峰面积分别为A1和B1（待测物和内标的理论浓度分别为8ng/ml和5ng/ml）
2  取500ul空白血浆，萃取，离心，挥干，流动相配制含待测物和内标的理论浓度分别为8ng/ml和5ng/ml的溶液150ul复溶之，取20ul进样，得待测物和内标的峰面积分别为A2和B2
3 流动相配制含待测物和内标的理论浓度分别为8ng/ml和5ng/ml的溶液150ul，取20ul进样，得待测物和内标峰面积分别为A3和B3
计算：
提取回收率：待测物=A1/A2  内标=B1/B2  同类基质下的比较，表征加样回收率大小
基质效应：待测物=A2/A3  内标=B2/B3  不同基质下，同样的理论浓度比较，表征基质对测定的影响程度，离子增强或离子抑制程度
过程有效率：待测物=A1/A3 内标=B2/B3  整个方法的总体效率

3方面结合评价一个方法的可靠与否。低、中、高浓度都要以上述办法评价。

以上为我们承接I期临床药代动力学或生物等效性研究时采取的方法学验证办法。

从现在的注册审查要求来看，回收率不一定要多高，能满足测定灵敏度要求足矣；基质效应要小，我们实验室的标准为90-110%，实践证明，基质效应大时往往测样量大时carry over明显，测定结果不可靠。

啰嗦半天，希望有所帮助