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友谊无限

金虫 (小有名气)

[求助] 如何正确计算药代中药物的提取回收率?

大家好!
   我正在做药代动力学中药物的提取回收率,看了很多文献,但提取回收率的做法不一,所以想请教大家给予正确的做法。
   我是这样做提取回收率的:1.取一个浓度的标准溶液(比如8ug/ml的标准液)100ul,加入空白血浆0.5ml,再加内标50ul,加少量磷酸后,涡旋混匀。然后加入3ml的乙酸乙酯进行萃取,涡旋3min,离心(4000r/min)10min,取一定量的上清液,在45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A1、A2,R1=A1/A2。   2. 另取8ug/ml的标准液100ul,再加内标50ul,混匀后于45°C水浴中氮气流吹干,残渣用流动相150ul复溶,高速离心后,进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A3、A4,R2=A3/A4 。
   提取回收率的计算如下:
   方法一:R=A1/A3 (直接用药物峰面积之比计算)
   方法二:R=R1/R2  (用药物与内标的比值计算)
   请教各位做药代动力学的朋友,我所做的药物提取回收率方法是否正确?
   计算提取回收率是应该用方法一,还是方法二?
   我参考了许多文献,但做法不一,所以希望大家能给予帮助,非常感谢!
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友谊无限

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 陈林霖 at 2011-09-25 14:52:55:
方法2是错误的,用这个方法无论样品和内标的提取率均为50%,或均为100%,算出的回收率都是一样的,步骤1的内标应在提取后加入

哦,我现在都有点糊涂了,呵呵!   如果方法2是错的,请问正确的方法要怎么做呢?
   如果内标是在提取后加入,那好像内标的作用就不太大了,请赐教! 谢谢!
努力追求更好!
8楼2011-09-25 17:54:40
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兰黛诗

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

友谊无限(金币+3): 2011-09-24 16:41:35
那你的标曲如何做?
直接用A1/A2吧
方法一是没道理的,根本体现不出内标的作用
方法二虽然体现了内标的作用,但是太繁琐了吧,没有必要
2楼2011-09-24 14:37:08
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友谊无限

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 兰黛诗 at 2011-09-24 14:37:08:
那你的标曲如何做?
直接用A1/A2吧
方法一是没道理的,根本体现不出内标的作用
方法二虽然体现了内标的作用,但是太繁琐了吧,没有必要

感谢指导!  我的标曲是用A1/A2做的,如果方法一、方法二都不合理,请问如何计算才正确?  谢谢!
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3楼2011-09-24 16:44:18
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兰黛诗

金虫 (小有名气)

不用客气,我做的回收率是将加样回收率的样品直接进样,得到样品与内标的峰面积比值,带入标准曲线,计算样品含量,将计算所得含量比加样量。
4楼2011-09-24 17:15:57
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