【答案】应助回帖

没有到不了的明天！

21楼2011-10-02 12:21:06

友谊无限

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21楼: Originally posted by lwfazyy at 2011-10-02 12:21:06:
刚刚想起你做的一点不妥的地反个，再指出一下

你的方法是，标准溶液100ul+空白血浆500ul+内标50ul......来提取，这种做法是不可取的。
为保证浓度相当，可加入10倍浓度的标准溶液10ul+空白血浆500ul+10倍浓度 ...

感谢指导！
我以前考虑过楼主的想法，但如果药物标准液取10ul，内标取5ul，这样的话取的量有点少，加大了操作的误差。
我现在的做法可以这样：先取标准液100ul，挥干，再加空白血浆500ul+内标50ul，这样的话浓度就相当了！

努力追求更好！

22楼2011-10-02 15:52:59

shuishangjun

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【答案】应助回帖

友谊无限(金币+1): 2011-10-16 11:58:49

楼主的算法还是有点问题啊，HPLC-UV和HPLC-MS/MS的算法是不一样的，因为HPLC-MS/MS还要考虑基质效应，而HPLC-UV不用考虑。建议多看看外文的文章，J chromatography B上好的文章里都有啊！

天天快乐

23楼2011-10-16 11:55:51

xcy654

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

不管是相对回收率还是绝对回收率都是药物峰面积比而不是药物与内标峰面积比即:药物回收率为药物峰面积比内标回收率为内标峰面积比

24楼2012-02-13 09:51:01

lihui5456

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【答案】应助回帖

1  取标准溶液（100ng/ml）10ul，+空白血浆490ul，+内标（50ng/ml）10ul，加入1Ml有机溶剂，混匀，萃取，离心，取0.8ml上清，挥干，以100ul流动相复溶，取20ul进样，得待测物和内标峰面积分别为A1和B1（待测物和内标的理论浓度分别为2ng/ml和1ng/ml）
2  取490ul空白血浆+10ul标准溶液稀释用溶剂+10ul内标溶解用溶剂，加入1Ml有机溶剂萃取，离心，取0.8ml上清，挥干，流动相配制含待测物和内标的理论浓度分别为2ng/ml和1ng/ml的溶液100ul复溶之，取20ul进样，得待测物和内标的峰面积分别为A2和B2
计算：
提取回收率：待测物=(A1/A2)*(1/0.8)*100%  内标=(B1/B2)*(1/0.8)*100%该方法能正确反映溶剂的萃取效率极其整个操作中的提取效率。其中(1/0.8)为提取系数，是根据“加入1Ml有机溶剂，取0.8ml上清”计算的。
为了更好的模拟生物情况，一般要求加入的标准溶液和内标体积尽可能的小，但是过小的体积也带来更大的误差。对于用水或者甲醇：水=1:1配置的溶液，可以适当加大体积，可以适当控制在血浆体积的10%以内。而对于完全的乙腈、甲醇溶剂，建议控制在1/50以内，或者在加入血浆前挥干。

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Iris

25楼2012-05-31 11:47:46

茜草02123

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引用回帖:

1967282楼: Originally posted by lwfazyy at 2011-09-28 20:09:09
方法学考核时要考核提取回收率、过程有效率和基质效应，且待测物和内标均要考核。
做法举例：
1 取标准溶液（80ng/ml）10ul，+空白血浆500ul，+内标（50ng/ml）10ul，混匀，萃取，离心，挥干，以100ul流动相复溶 ...

您好~写得很详细，谢喽！

~我最近在做基质效应，但是效果很不理想~麻烦您帮我看看有什么问题~精密量取空白血浆100μl，加入200μl混标，涡旋1min，加乙酸乙酯100μl，涡旋3min，14000r/min，离心15min，取上清液50μl。再加入乙酸乙酯100μl，同法操作，取上清液100μl，合并两次上清液，室温下氮气吹干。残渣用50μl乙腈复溶。每个浓度平行制备3份。得到的峰面积为A1。混标峰面积A2。基质效应=A1/A2.
但是问题是我计算出的数值很大。有百分之两百的，大部分是百分之六七十。重复做了三批样品了。四个化合物的数值都很大。这是什么原因。您做的时候结果怎么样？都能在100%左右？？？一定要回复我呦~~谢谢啦！

请多多指教！

26楼2012-08-06 15:34:34

茜草02123

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引用回帖:

4587834楼: Originally posted by lihui5456 at 2012-05-31 11:47:46
1 取标准溶液（100ng/ml）10ul，+空白血浆490ul，+内标（50ng/ml）10ul，加入1Ml有机溶剂，混匀，萃取，离心，取0.8ml上清，挥干，以100ul流动相复溶，取20ul进样，得待测物和内标峰面积分别为A1和B1（待测物和内标 ...

不好意思，方法复制错了。
精密量取空白血浆100μl，加乙酸乙酯200μl，涡旋3min，14000r/min，离心10min，取上清液100μl。再加入乙酸乙酯200μl，同法操作，取上清液200μl，合并两次上清液，室温下氮气吹干。残渣分别用100μl中、低浓度混合标准品复溶，每个浓度平行制备3份。得到的峰面积为A1。混标峰面积A2。基质效应=A1/A2.
问题是我计算出的数值很大。有百分之两百的，大部分是百分之一百六七十。重复做了三批样品了。四个化合物的数值都很大。这是什么原因。您做的时候结果怎么样？都能在100%左右？？？一定要回复我呦~~谢谢啦！

请多多指教！

27楼2012-08-06 15:41:11

lihui5456

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4651733楼: Originally posted by 茜草02123 at 2012-08-06 15:41:11
不好意思，方法复制错了。
精密量取空白血浆100μl，加乙酸乙酯200μl，涡旋3min，14000r/min，离心10min，取上清液100μl。再加入乙酸乙酯200μl，同法操作，取上清液200μl，合并两次上清液，室温下氮气吹干 ...

基质效应算出来不一定都能达到100%，这个东西和方法有很大的关系，国内外也没统一的说法。一般你的百分之六七十，只要稳定，应该也是可以的吧。

Iris

28楼2012-08-06 21:28:24

aydzy2006

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个人认为方法一合理，。

29楼2012-08-10 15:01:54