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友谊无限

金虫 (小有名气)

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[求助] 如何正确计算药代中药物的提取回收率？

大家好！
我正在做药代动力学中药物的提取回收率，看了很多文献，但提取回收率的做法不一，所以想请教大家给予正确的做法。
我是这样做提取回收率的：1.取一个浓度的标准溶液（比如8ug/ml的标准液）100ul，加入空白血浆0.5ml，再加内标50ul，加少量磷酸后，涡旋混匀。然后加入3ml的乙酸乙酯进行萃取，涡旋3min，离心（4000r/min）10min，取一定量的上清液，在45°C水浴中氮气流吹干，残渣用流动相150ul复溶，高速离心后，进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A1、A2，R1=A1/A2。 2. 另取8ug/ml的标准液100ul，再加内标50ul，混匀后于45°C水浴中氮气流吹干，残渣用流动相150ul复溶，高速离心后，进样30ul。得到药物与内标的峰面积分别为A3、A4，R2=A3/A4 。
提取回收率的计算如下：
方法一：R=A1/A3 （直接用药物峰面积之比计算）
方法二：R=R1/R2 （用药物与内标的比值计算）
请教各位做药代动力学的朋友，我所做的药物提取回收率方法是否正确？
计算提取回收率是应该用方法一，还是方法二？
我参考了许多文献，但做法不一，所以希望大家能给予帮助，非常感谢！

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努力追求更好！

1楼2011-09-24 13:38:15

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lihui5456

木虫 (小有名气)

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专业: 药物代谢与药物动力学

【答案】应助回帖

1  取标准溶液（100ng/ml）10ul，+空白血浆490ul，+内标（50ng/ml）10ul，加入1Ml有机溶剂，混匀，萃取，离心，取0.8ml上清，挥干，以100ul流动相复溶，取20ul进样，得待测物和内标峰面积分别为A1和B1（待测物和内标的理论浓度分别为2ng/ml和1ng/ml）
2  取490ul空白血浆+10ul标准溶液稀释用溶剂+10ul内标溶解用溶剂，加入1Ml有机溶剂萃取，离心，取0.8ml上清，挥干，流动相配制含待测物和内标的理论浓度分别为2ng/ml和1ng/ml的溶液100ul复溶之，取20ul进样，得待测物和内标的峰面积分别为A2和B2
计算：
提取回收率：待测物=(A1/A2)*(1/0.8)*100%  内标=(B1/B2)*(1/0.8)*100%该方法能正确反映溶剂的萃取效率极其整个操作中的提取效率。其中(1/0.8)为提取系数，是根据“加入1Ml有机溶剂，取0.8ml上清”计算的。
为了更好的模拟生物情况，一般要求加入的标准溶液和内标体积尽可能的小，但是过小的体积也带来更大的误差。对于用水或者甲醇：水=1:1配置的溶液，可以适当加大体积，可以适当控制在血浆体积的10%以内。而对于完全的乙腈、甲醇溶剂，建议控制在1/50以内，或者在加入血浆前挥干。