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xiaoqiu2010

金虫 (小有名气)

[求助] 药代动力学血样处理问题

我刚刚接触药代动力学,对血样的处理有很多问题,忘高手指点:
1、我的药品在水中不溶,加吐温80和甘油后可澄清,是否可以静脉注射?还有对于吐温与甘油的量有没有要求?
2、血样处理我选择的乙酸乙酯+甲醇萃取,我的操作步骤是请萃取,离心,取上清,吹干,复溶,HPLC分析
问题是:A:一般萃取几次,萃取一次可以吗?
B:萃取之后取上清是定量取,还是全部取出?如果全部取出,每个样品不能保证萃取率相同怎么办?
C:吹干复溶的体积一般多大,我计划取100uL血浆,300uL萃取剂萃取。我的问题是转移到容量瓶定容是否可行?因为有人建议我转移到容量瓶,但是我觉得,转移过程可能会有损失,并且容量瓶定容是否会稀释倍数太高,检测不到?
3、看文献有用沉淀蛋白的方法,离心直接进样,这样对柱子的损伤有多大?柱子一般使用寿命会多长?
希望有人能给与知道,谢谢!
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边走边学,边学边用,边用边问
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tsunamimiao

金虫 (小有名气)

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★
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-12-19 15:05:06
吐温80不清楚,应该油含量限定的,甘油是等渗剂,含量2.25%,液液萃取一般是一次,萃取不一定要全部萃完,最后按比例换算回来,不需要用容量瓶
2楼2011-12-19 14:43:07
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wangtingbin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-12-19 15:05:11
同楼上 萃取一般一次就可以了 取上清不必要都取上来 如果有内标 只要保证每次取的量一致就可以了 如果都取上来 容易取到下层 进柱子麻烦就大啦 你的c问题 我没太看懂啊 哪一步要定容?复溶后直接进样不就可以了?
不卑不亢 厚积薄发
3楼2011-12-19 15:04:24
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shijinzzu

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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xiaoxiao270(金币+1): 谢谢 2011-12-19 22:56:45
楼上两位说的很好,萃取一次足矣,直接注射吐温80是不可以的,不知道楼主的药物溶于乙醇不溶,我知道一种药物就是溶于吐温80后再用13%的乙醇稀释至浓度静脉注射的,另外,吹干复溶的体积是要根据进液相后的情况而定的,你要先做回收率实验,确定检测限之后再决定
大道至简,知易行难
4楼2011-12-19 21:18:52
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longshanzhao

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-12-20 09:02:32
1. 也可以用DMSO;
2. 一般萃取一次,如果不纯的话,可以考虑萃取两次;
  看你样品浓度是否大,如果浓度大,定量取,如果浓度小,在尽可能全部吸取上清液的情况下定量取;
  复溶的体积一般100ul就够了,复溶后要离心哦;
  直接沉淀蛋白也行,但是要接保护柱,我进了一千多个样品也没事。
天道酬勤
5楼2011-12-20 08:58:43
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xiaofeiwa

新虫 (小有名气)

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xiaoqiu2010(金币+5): ★★★很有帮助 十分感谢 2012-01-09 20:53:39
1、我的药品在水中不溶,加吐温80和甘油后可澄清,是否可以静脉注射?还有对于吐温与甘油的量有没有要求?

建议多尝试几个常用溶剂,乙醇,异丙醇,乙醇注射液中浓度不要超过5%,不过这是基于动物福利来讲得。适当可以放宽到10%,再高就影响动物代谢了。

也可以尝试DMSO,注射液中浓度不超过5%。目前欧盟已经禁止在动物实验中使用了,不过国内还没有规定。

2、血样处理我选择的乙酸乙酯+甲醇萃取,我的操作步骤是请萃取,离心,取上清,吹干,复溶,HPLC分析
问题是:A:一般萃取几次,萃取一次可以吗?
萃取的次数主要看你的方法回收率,一般在80%以上就没有关系。反正你标准曲线同样方法操作,不影响结果。但是萃取前要加入内标。

B:萃取之后取上清是定量取,还是全部取出?如果全部取出,每个样品不能保证萃取率相同怎么办?

使用内标法就随便取,不会有问题。不过如果不定量取,最后内标会比较难看,建议还是定量取。但是这样在回收率上会有损失。
在样品较稀有的情况下,才使用全部取出的方法。

C:吹干复溶的体积一般多大,我计划取100uL血浆,300uL萃取剂萃取。我的问题是转移到容量瓶定容是否可行?因为有人建议我转移到容量瓶,但是我觉得,转移过程可能会有损失,并且容量瓶定容是否会稀释倍数太高,检测不到?

300ul这么小的容量瓶?
PK实验一般都是在1.5ml的离心管里配样的。使用普通的移液器来做定量。不明白容量瓶的用意。

3、看文献有用沉淀蛋白的方法,离心直接进样,这样对柱子的损伤有多大?柱子一般使用寿命会多长?

直接沉淀完全没有问题。CRO公司都是首推直接沉淀,多么经济实惠的方法。UPLC的柱子,那要做好保护,如果是普通的柱子,随便折腾吧,耐用着呢,就是大量进样后记得冲洗保养就好了。
6楼2011-12-26 15:27:55
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xiaofeiwa

新虫 (小有名气)

内容已删除
7楼2011-12-26 15:31:02
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小木虫

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

8楼2012-05-10 20:08:20
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371147760

木虫 (著名写手)

看你萃取的回收率了,一次低的话就要两次了,通常萃取完是要全部吸出的,不是定量吸出。
有的直接沉淀蛋白后,过滤上样,如果检测良好的话也是可以的
9楼2012-05-15 20:56:38
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