应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】生物样品的前处理-沉淀蛋白质
201/2返回列表12下一页
查看: 4316  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小珍珍

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】生物样品的前处理-沉淀蛋白质 已有12人参与

书上讲的和一篇文献里讲的有些矛盾，但是我又是初学者不敢确定自己理解得对不对，想和虫友们讨论一下。
       生物样品进高效前都要经过前处理，在沉淀蛋白质时有一种方法是加入能与水混溶的有机溶剂。
      一、书上讲到
      “加入甲醇或乙腈后对血浆样品有一定的稀释作用，上清液中药物浓度会比原来低，且由于甲醇或乙腈的存在无法再用三氯甲烷、乙酸乙酯等有机溶剂萃取和浓集，甲醇-水（或乙腈-水）的混合液也很难挥干浓集，因此用甲醇或乙腈沉淀蛋白质直接进行测定的方法有时达不到反相HPLC测定灵敏度要求"。
       二、但是我在一篇文献上又看到
      '血浆样品为0.5 mL,加于聚丙烯离心管中;加入0·7 mL甲醇,手动振摇1 min; 3 500 r/min离心10 min;取上清液于另一离心管中,以0.5 mol/LNaOH调节pH至9;加入0.5 mL三氯甲烷,手动震摇10 min;然后以3 500 r/min离心10 min;取上清液,用0.5 mL三氯甲烷再提取一次后,小心弃去上清与氯仿层中间的变性蛋白层,合并二次的氯仿层, 40~50℃水浴挥干氯仿;在剩余残渣中加入500μL流动相,震荡使其溶解,过滤后上样。'
       文献里用甲醇做变性剂后继续用三氯甲烷来提取  是不是有问题啊

[ Last edited by 小珍珍 on 2010-5-8 at 14:08 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-08 14:03:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

billy96406

铁杆木虫 (小有名气)
★
xiaodu2007693(金币+1):谢谢参与交流~ 2010-05-10 14:39:50
文献中的方法的样品最终是存在于氯仿层中，加甲醇是使蛋白变性，沉淀，加碱碱化游离，进入氯仿层，并不是和书中所说的加甲醇或乙腈沉淀蛋白直接进样。两者是有区别的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-05-08 21:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuwen78

禁虫 (小有名气)
★
小珍珍(金币+1): 2010-05-10 10:56:19
xiaodu2007693(金币+1):谢谢参与交流~ 2010-05-10 14:39:31
本帖内容被屏蔽
5楼2010-05-09 10:44:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzhaomin

金虫 (著名写手)
★
小珍珍(金币+2): 2010-05-10 10:53:39
xiaodu2007693(金币+1):谢谢参与交流~ 2010-05-10 14:39:39
小珍珍(金币+1): 2010-05-19 00:41:18
为什么液液萃取前还要进行蛋白沉淀呢
推荐一个液液萃取的萃取液
正己烷-二氯甲烷-异丙醇（2:1:0.1），可在血浆中适当地加入1mol/L的碳酸钠，然后加入萃取液，涡旋，取上清吹干，流动相复溶，再高速离心一下；
根据药物的回收率 调整萃取液的三者比例
一般能达到要求
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-05-10 10:43:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

hongqianqian

银虫 (小有名气)
哪本书上这么说过呢？
文献里德做法没错~
赞一下 回复此楼
快乐多多，好运多多~
2楼2010-05-08 16:16:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小珍珍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hongqianqian at 2010-05-08 16:16:13:
哪本书上这么说过呢？
文献里德做法没错~

傅强主编的药物分析实验方法学，人民卫生出版社的
赞一下 回复此楼
3楼2010-05-08 20:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小珍珍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liuzhaomin at 2010-05-10 10:43:55:
为什么液液萃取前还要进行蛋白沉淀呢
推荐一个液液萃取的萃取液
正己烷-二氯甲烷-异丙醇（2:1:0.1），可在血浆中适当地加入1mol/L的碳酸钠，然后加入萃取液，涡旋，取上清吹干，流动相复溶，再高速离心一下；
...

谢谢  我去尝试一下
赞一下 回复此楼
7楼2010-05-10 10:53:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小珍珍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xuwen78 at 2010-05-09 10:44:17:
书上讲的是对的，也是普遍适用的，但有时血浆中的杂质对测定有干扰采用一种方法预处理不能完全去除时会考虑采用多种预处理方法联用，这篇文献就是如此，即蛋白沉淀+液液萃取，通常情况下液液萃取很少加与水混溶的 ...

液液萃取的目的是不是为了更多地除去杂志保护柱子，还有就是提高提取回收率？有说是液液萃取反而会降低回收率，是这样吗？
赞一下 回复此楼
8楼2010-05-10 10:56:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuwen78

禁虫 (小有名气)
★
xiaodu2007693(金币+1):谢谢参与交流~ 2010-05-10 14:39:18
小珍珍(金币+1): 2010-05-11 12:23:30
本帖内容被屏蔽
9楼2010-05-10 14:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小珍珍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liuzhaomin at 2010-05-10 10:43:55:
为什么液液萃取前还要进行蛋白沉淀呢
推荐一个液液萃取的萃取液
正己烷-二氯甲烷-异丙醇（2:1:0.1），可在血浆中适当地加入1mol/L的碳酸钠，然后加入萃取液，涡旋，取上清吹干，流动相复溶，再高速离心一下；
...

加入1mol/L的碳酸钠的作用是什么呀？
赞一下 回复此楼
10楼2010-05-19 00:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小珍珍 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 24/1200 2026-08-16 10:16 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭