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carina8559

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】血浆样品做固相萃取前要不要沉淀蛋白? 已有4人参与

请问血浆样品做固相萃取之前要不要先沉淀蛋白?

因为做完固相萃取后要做液相检测,但是看见在很多文献里都是直接将血浆样品稀释以后就做SPE,然后洗脱液蒸干复溶就做HPLC,这样的话里面的蛋白不会堵住色谱柱吗?

如果要沉淀的话,请问是用乙腈还是高氯酸?

谢谢。
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09yschen

金虫 (正式写手)

★ ★
waiy2001(金币+2):谢谢回复 2010-05-22 23:32:31
看你的目标物会不会和蛋白质结合了,如果会的话,当然要破坏蛋白(除非你是做药物结合率之类的),
除蛋白一般用乙腈,再离心,再旋转蒸发,我们做尿液相品是用这种方法,血浆的也差不多吧。
2楼2010-05-22 21:13:53
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carina8559

新虫 (初入文坛)

除完蛋白还要旋转蒸发?不能直接上固相萃取柱?
3楼2010-05-22 22:05:24
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waiy2001

荣誉版主 (著名写手)

至尊无上之尤文图斯


铁甲骑兵(金币+1):回复的很简明啊。 2010-05-27 07:03:31
如果用乙腈就不用蒸发了吧
尤文舜天
4楼2010-05-22 23:34:08
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hellohygo


铁甲骑兵(金币+1):感谢指点。 2010-05-27 07:03:01
carina8559(金币+2):谢谢 2010-05-30 10:17:59
要不要旋干(一般是吹干),要看你的固相萃取小柱,假如你用的是C18小柱,那么你用乙腈沉淀蛋白后直接上柱,肯定保留不住,因为乙腈是C18的洗脱溶剂。

可以先将血浆用水或缓冲盐稀释后上样试试
5楼2010-05-23 09:52:13
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carina8559

新虫 (初入文坛)

有道理啊,我用的就是C18柱,难怪洗下来都没有我要的东西了。但是直接稀释血浆以后就上样,等到后面进液相检测的时候不会有蛋白损伤色谱柱吗?
6楼2010-05-26 23:35:44
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