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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白质等电点沉淀
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caoji

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白质等电点沉淀

请教蛋白质等电点沉淀的问题，我做SOD的等电点沉淀，其等电点为4.1，沉淀之后蛋白不能重新溶解恢复活性？请教这样能使其恢复活性？
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1楼 2010-10-11 16:34:20
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
caoji(金币+1): 2010-10-11 16:56:11
加Urea重新溶解啊，控制好浓度和时间。
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2楼2010-10-11 16:41:06
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caoji

银虫 (小有名气)
求具体操作，操作详细，经确认有效金币全部赠送
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3楼2010-10-11 16:58:24
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
caoji(金币+1):先加一个，实验成功再多送 2010-10-11 18:49:23
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-10-11 19:47:21
看你蛋白质量的多少啊：如果多的话直接在烧杯中操作即可，算好体积然后加尿素至终浓度1M，看溶解情况，不溶的话继续加尿素至2M，以此类推，差不多到不了4M你的蛋白就变澄清溶解了，注意：整个过程在冰水浴中进行，并用转子不断搅拌。如果蛋白样量少的话可以在透析袋中进行，方法同上，只是平衡的时间要稍微长一些，一般一个浓度（如1M）要平衡2个小时左右。
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4楼2010-10-11 17:06:11
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
caoji(金币+1):谢谢参与
caoji(金币+1): 2010-10-12 10:35:23
以我做蛋白的经验看蛋白等点沉淀法慎用！有可能沉了就挂了。不过不绝对！
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5楼2010-10-11 19:26:48
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
caoji(金币+1):谢谢参与
caoji(金币+1): 2010-10-12 10:35:27
我也是，可能因为初次做不清楚，蛋白质全挂了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2010-10-11 19:53:43
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x286667863

银虫 (正式写手)
★ ★
caoji(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-10-12 09:31:38
caoji(金币+1): 2010-10-12 10:35:32
等电点都是结合其他蛋白沉析的方法一起进行的，单独使用好像不常见吧!
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7楼2010-10-12 08:48:20
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