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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » bl21超声破壁问题
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donnafeng

金虫 (小有名气)

[求助] bl21超声破壁问题

都说判断超声破壁是否充分要看溶液是否澄清  但是我的菌在同样的条件下 空的bl21破壁可以澄清  而转化了的bl21只是比开始的时候略微清了一点 再继续超的话沉淀就会出现黑色的东西  这种情况是不是因为我的可溶性表达比较少 大部分生成了包涵体  还是因为我的缓冲液ph和我的蛋白等电点太近了 一边破壁释放出蛋白来一边就等电沉淀了？
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1楼2012-02-19 14:16:56
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donnafeng

金虫 (小有名气)
没有人有相关经历吗
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2楼2012-02-21 10:34:22
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mhmtf

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
donnafeng(金币+1): 只是有一点点 超声在冰水裕开1s停2s没有超温的 2012-02-21 23:07:13
黑色的东西是，温度太高细胞碳化了。。。。
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gdfh
3楼2012-02-21 12:55:07
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
donnafeng(金币+5): ★有帮助 做过这个电泳的 问题是有包涵体的时候是不是怎么超都不会清亮呢 2012-02-21 23:09:00
donnafeng(金币+44): ★★★★★最佳答案 嗯 这下明白了 谢谢 2012-02-22 18:57:56
引用回帖:
2楼: Originally posted by donnafeng at 2012-02-21 10:34:22:
没有人有相关经历吗

我最近也在做BL21菌的超声破碎。按你的情况，你的蛋白是以包涵体形式表达的，如果想确定的话，可以超完声离心把上清和沉淀做个SDS-PAGE，要是包涵体的话，大部分蛋白会在沉淀里。出现黑色沉淀是超声功率有点大。
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坚持就是胜利
4楼2012-02-21 13:47:47
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karin

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by karin at 2012-02-21 13:47:47:
我最近也在做BL21菌的超声破碎。按你的情况，你的蛋白是以包涵体形式表达的，如果想确定的话，可以超完声离心把上清和沉淀做个SDS-PAGE，要是包涵体的话，大部分蛋白会在沉淀里。出现黑色沉淀是超声功率有点大。

是的，如果蛋白形成包涵体的话，超声后只能比超声前显澄清，是不能特别清亮的。
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坚持就是胜利
5楼2012-02-22 09:01:59
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