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tigerpaw

木虫 (正式写手)

[求助] 关于蛋白分离纯化实验设计思路!!!!!!!急急急

各位高手帮帮忙!!!!!!
实验目的:分离一种胞内蛋白,杂蛋白分子量12-120KD,需要纯化40KD的目的蛋白,但是有一种分子量相近蛋白(43KD)干扰,且目的蛋白与干扰蛋白等电点相差为0.5,那如何设计实验分离目的蛋白,只需总体思路,具体操作不用详述,跪谢!!!
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兴隆

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+3): 谢谢 2011-05-04 13:01:06
可以试一下不同的方法,比如浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术。
大胆谨慎,客观务实。
2楼2011-05-04 10:19:08
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prigogin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+2): 言之有理 2011-05-04 13:01:54
亲和、疏水、离子交换等等。

蛋白质间的差别和区分并不是只有分子量和等电点。
3楼2011-05-04 10:28:03
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lunchlanqi

禁言 (小有名气)

tigerpaw(金币+2): 多谢交流 2011-05-04 19:47:00
本帖内容被屏蔽

4楼2011-05-04 15:47:14
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xili1026

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+2): 谢谢 2011-05-04 19:47:42
试一下液相不知道行不行
5楼2011-05-04 16:30:46
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jacobgo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+3): 好主意 2011-05-04 19:48:11
分子量相近SEC不行
等电点相近,IEC估计也不行
可以根据疏水性差异尝试盐析沉淀、疏水层析
路遥远,我们一起走
6楼2011-05-04 16:40:09
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hitzbz

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+2): 多谢交流 2011-05-05 13:43:00
凝胶和离子基本排除---


试试疏水、反相吧---
stay hungry,stay foolish----------
7楼2011-05-04 20:43:54
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inhahu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+2): 谢谢 2011-05-05 13:43:12
首先要确定目标蛋白和杂蛋白之间的差别(除了分子量和等电点),然后根据他们某个性质的不同来选取相应的分离方法。
8楼2011-05-05 09:48:44
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dannyboy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+3): 非常感谢 2011-05-05 22:33:43
建议采用疏水作用层析,首选是phenyl hp ,i然后用反相液相进行纯度分析和目标蛋白的定位,
如果你有该目标蛋白的标准品,那更好。
9楼2011-05-05 22:14:51
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落满夏天

银虫 (正式写手)

tigerpaw: 回帖置顶 2011-12-06 19:28:45
等电点接近离子交换很难做了,看分子量差距大不大,跑电泳试试,如果有特征结构的话考虑亲和又快纯度又高,还有一个办法就是疏水和反向,应该可以。都不行就从菌种上找找看。
星星之火,可以燎原
10楼2011-12-06 15:47:28
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