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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 关于蛋白分离纯化实验设计思路！！！！！！！急急急
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tigerpaw

木虫 (正式写手)

[求助] 关于蛋白分离纯化实验设计思路！！！！！！！急急急

各位高手帮帮忙！！！！！！
实验目的：分离一种胞内蛋白，杂蛋白分子量12-120KD，需要纯化40KD的目的蛋白，但是有一种分子量相近蛋白（43KD）干扰，且目的蛋白与干扰蛋白等电点相差为0.5，那如何设计实验分离目的蛋白，只需总体思路，具体操作不用详述，跪谢！！！
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聪明的人能洞察事物未来的发展趋势，他们在洪水来之前养鸭而不养鸡。
1楼 2011-05-03 20:34:18
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兴隆

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+3): 谢谢 2011-05-04 13:01:06
可以试一下不同的方法，比如浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术。
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大胆谨慎，客观务实。
2楼2011-05-04 10:19:08
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prigogin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+2): 言之有理 2011-05-04 13:01:54
亲和、疏水、离子交换等等。

蛋白质间的差别和区分并不是只有分子量和等电点。
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3楼2011-05-04 10:28:03
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lunchlanqi

禁言 (小有名气)
tigerpaw(金币+2): 多谢交流 2011-05-04 19:47:00
本帖内容被屏蔽
4楼2011-05-04 15:47:14
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xili1026

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+2): 谢谢 2011-05-04 19:47:42
试一下液相不知道行不行
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5楼2011-05-04 16:30:46
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jacobgo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+3): 好主意 2011-05-04 19:48:11
分子量相近SEC不行
等电点相近，IEC估计也不行
可以根据疏水性差异尝试盐析沉淀、疏水层析
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路遥远，我们一起走
6楼2011-05-04 16:40:09
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hitzbz

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+2): 多谢交流 2011-05-05 13:43:00
凝胶和离子基本排除---


试试疏水、反相吧---
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stay hungry,stay foolish----------
7楼2011-05-04 20:43:54
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inhahu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+2): 谢谢 2011-05-05 13:43:12
首先要确定目标蛋白和杂蛋白之间的差别（除了分子量和等电点），然后根据他们某个性质的不同来选取相应的分离方法。
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8楼2011-05-05 09:48:44
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dannyboy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tigerpaw(金币+3): 非常感谢 2011-05-05 22:33:43
建议采用疏水作用层析，首选是phenyl hp ，i然后用反相液相进行纯度分析和目标蛋白的定位，
如果你有该目标蛋白的标准品，那更好。
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9楼2011-05-05 22:14:51
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落满夏天

银虫 (正式写手)
tigerpaw: 回帖置顶 2011-12-06 19:28:45
等电点接近离子交换很难做了，看分子量差距大不大，跑电泳试试，如果有特征结构的话考虑亲和又快纯度又高，还有一个办法就是疏水和反向，应该可以。都不行就从菌种上找找看。
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星星之火，可以燎原
10楼2011-12-06 15:47:28
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