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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】生物样品的HPLC分析
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416858594

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】生物样品的HPLC分析 已有8人参与

现在,我想要通过对人体的尿液进行HPLC分析，来寻找某一种疾病是否在正常人和病人两个群体间具有差异性,类似于寻找标志物来建立一个检测方法。
但是 人体尿液中的代谢物成分很复杂 而我们的目的只是想对尿液的成分进行一个完全的分析 通过HPLC能达到这样的目的么?  我询问过一些老师,他们说HPLC达不到这样的要求 需要对样品进行前处理和分离萃取 有目的性地分析里面的某一类成分 请问大家有什么好的方法或者建议,抑或是想法,能达到尿液里面成分的全面分析。。    我有一个想法 不知道是否可行  对尿液进行前处理除去蛋白质 然后通过制备柱进行初步的分离 取不同时间段的收集液进行HPLC分析。。这样可行么?
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1楼 2010-09-26 13:19:30
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herenren

禁虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
pplover(金币+1):感谢回复！有什么好的前处理方法提供给lz呢？ 2010-09-26 21:23:57
本帖内容被屏蔽
2楼2010-09-26 13:43:16
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416858594

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by herenren at 2010-09-26 13:43:16:
尿液成分那么复杂，肯定得经过比较多的前处理的

达不达得到我估计小木虫里没人能告诉你，只能你自己试试看

希望大家有什么想法建议 都可以谈谈啦。。 相互交流进步
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3楼2010-09-26 18:06:13
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yensh

金虫 (文坛精英)

优秀版主
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
pplover(金币+2):谢谢指导！ 2010-09-26 21:24:38
引用回帖:
Originally posted by 416858594 at 2010-09-26 13:19:30:
现在,我想要通过对人体的尿液进行HPLC分析，来寻找某一种疾病是否在正常人和病人两个群体间具有差异性,类似于寻找标志物来建立一个检测方法。
但是 人体尿液中的代谢物成分很复杂 而我们的目的只是想对尿液的成分 ...

我理解为您想通过HPLC方法做代谢组学研究~~~~

关键问题：蛋白沉淀；目标组分的提取；差异组分的鉴定

能否用2D-LC来解决复杂性问题；其次差异组分还需要MS作为检测器。

建议：文献检索，关键词 metabolomics； urine and LC-MS
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ID已经更换，此ID作废
4楼2010-09-26 18:37:29
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温炎

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
pplover(金币+1):感谢提供思路！ 2010-09-26 21:24:59
我个人认为要进行如下步骤：1  确定分析目标，
                                       2  确定纯化路线，进而减少干扰。
                                       3  确定目标的出峰位置，可能的话采购一些内标物。
                                       4  实验对比。
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人要活着才有希望！！
5楼2010-09-26 18:59:01
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粉靛蓝

木虫 (著名写手)
★ ★
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pplover(金币+1):感谢回复！ 2010-09-26 21:25:19
这个涉及的比较多，HPLC检测只是这个工程中的一个很小的分支，楼主还是要把试验方案好好搞清楚，尤其是分离纯化，并不是啥东西都拿来做HPLC，不同的样品还需要不同的柱子。
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6楼2010-09-26 19:37:31
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xkp123

木虫 (著名写手)
★ ★
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pplover(金币+1):感谢回复！有想法才会努力实现嘛，飞机火车也是这样制造出来滴！ 2010-09-26 21:31:35
LZ 这个方案实现的可能性为零，首先尿样基质比较复杂，你在除去某种物质时会不会把其他的物质也除去了？还有你提到制备做，我认为不可行，痕量组分很难通过制备来。
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7楼2010-09-26 19:56:51
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swt1898

铁虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以用SPE净化处理尿液吧？
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8楼2010-09-26 22:08:44
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416858594

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yensh at 2010-09-26 18:37:29:


我理解为您想通过HPLC方法做代谢组学研究~~~~

关键问题：蛋白沉淀；目标组分的提取；差异组分的鉴定

能否用2D-LC来解决复杂性问题；其次差异组分还需要MS作为检测器。

建议：文献检索，关键词 metab ...

谢谢您 但是 尿液当中成分很复杂 该如何进行前处理和提取才能使HPLC更好地分析呢  因为我用过甲醇沉淀蛋白离心取上清液后进行HPLC分析,但是峰形分得不是很好 分离度达不到1.5  因为要控制在60min内  如果超出60min的话 峰形又不好了 而且 后面出来的峰都是峰高很低的驼峰
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9楼2010-09-27 01:07:38
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416858594

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xkp123 at 2010-09-26 19:56:51:
LZ 这个方案实现的可能性为零，首先尿样基质比较复杂，你在除去某种物质时会不会把其他的物质也除去了？还有你提到制备做，我认为不可行，痕量组分很难通过制备来。

可能我表达的不是很好 我的意思是先用沉淀剂除去蛋白 然后再用制备柱做初步的分离 比如我每隔10min收集液体,然后再对每一部分收集液进行HPLC
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10楼2010-09-27 01:13:12
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