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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何在沉淀过程中保护蛋白
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xinyaolu

木虫 (小有名气)

[求助] 如何在沉淀过程中保护蛋白

本人目前在做一个蛋白的纯化，在前处理浓缩的时候，发现乙醇和硫酸铵沉淀后全部失活，请问各位，该加些什么保护剂才能使蛋白稳定（浓度如何），蛋白含有一个铁离子，1-3个二硫键
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1楼 2011-05-09 20:48:40
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xinyaolu(金币+10): 谢谢，但不适合我的实验 2011-05-10 14:36:45
silicare(金币-10): 不要乱发广告，差不多就行了 2011-05-10 18:31:17
内容已删除
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2楼2011-05-10 13:52:00
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以使用上海生工代理的国外产品OrgoSol-PROTEIN-Concentrate™
活性保持型蛋白沉淀式浓缩试剂盒（786-125）
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3楼2011-05-10 13:56:48
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德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

【答案】应助回帖

你蛋白失活很可能是氧化造成的，加点DTT试试，浓度0.5mM。
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我用我有限的青春等你的回心转意！
4楼2011-05-10 18:28:44
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 感谢交流，欢迎常来 2011-05-11 18:38:37
silicare(EPI+1): 2011-05-13 18:26:54
有的蛋白质就是对乙醇和硫酸铵敏感，就像我的蛋白质一样，如果用乙醇去沉淀，加了9倍体积之后产生的沉淀只有80%的目标蛋白质；如果用硫酸铵，在50%饱和度下不会沉淀，但从60%到100%时每个梯度下都有沉淀，随饱和度增大而增多，但最终得率只有50%不到。后来用异丙醇沉淀，加了9倍体积异丙醇之后得率100%，好得太多了。实在不行就换一种沉淀方法吧。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-05-11 02:07:58
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xinyaolu

木虫 (小有名气)
我加了10%甘油后，硫铵沉淀收率能到80%，但是透析后，失活达到90%。。。。
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6楼2011-05-12 22:23:39
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
透析是怎么操作的，包括很多原料
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7楼2011-05-13 18:53:57
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xinyaolu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-13 18:53:57:
透析是怎么操作的，包括很多原料

缓冲液加了10%甘油，20mM的tris-hcl，ph7.0，,4℃
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8楼2011-05-14 10:57:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

你可以试一下脱盐柱吗？Sephadex G25之类的。

看样子你的透析液没什么问题，是不是透析袋的孔径太大，蛋白质跑出去了？就剩下10%在袋子里也太可怕了。
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9楼2011-05-14 16:23:04
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牛小包

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-11 02:07:58
有的蛋白质就是对乙醇和硫酸铵敏感，就像我的蛋白质一样，如果用乙醇去沉淀，加了9倍体积之后产生的沉淀只有80%的目标蛋白质；如果用硫酸铵，在50%饱和度下不会沉淀，但从60%到100%时每个梯度下都有沉淀，随饱和度增 ...

请问异丙醇沉淀蛋白后，蛋白还能复性吗
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10楼2018-11-26 10:23:27
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