应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何在沉淀过程中保护蛋白
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 2033  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

xinyaolu

木虫 (小有名气)

[求助] 如何在沉淀过程中保护蛋白

本人目前在做一个蛋白的纯化，在前处理浓缩的时候，发现乙醇和硫酸铵沉淀后全部失活，请问各位，该加些什么保护剂才能使蛋白稳定（浓度如何），蛋白含有一个铁离子，1-3个二硫键
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-09 20:48:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xinyaolu(金币+10): 谢谢，但不适合我的实验 2011-05-10 14:36:45
silicare(金币-10): 不要乱发广告，差不多就行了 2011-05-10 18:31:17
内容已删除
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-10 13:52:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以使用上海生工代理的国外产品OrgoSol-PROTEIN-Concentrate™
活性保持型蛋白沉淀式浓缩试剂盒（786-125）
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-10 13:56:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

【答案】应助回帖

你蛋白失活很可能是氧化造成的，加点DTT试试，浓度0.5mM。
赞一下 回复此楼
我用我有限的青春等你的回心转意！
4楼2011-05-10 18:28:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 感谢交流，欢迎常来 2011-05-11 18:38:37
silicare(EPI+1): 2011-05-13 18:26:54
有的蛋白质就是对乙醇和硫酸铵敏感，就像我的蛋白质一样，如果用乙醇去沉淀，加了9倍体积之后产生的沉淀只有80%的目标蛋白质；如果用硫酸铵，在50%饱和度下不会沉淀，但从60%到100%时每个梯度下都有沉淀，随饱和度增大而增多，但最终得率只有50%不到。后来用异丙醇沉淀，加了9倍体积异丙醇之后得率100%，好得太多了。实在不行就换一种沉淀方法吧。
赞一下(2人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-05-11 02:07:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinyaolu

木虫 (小有名气)
我加了10%甘油后，硫铵沉淀收率能到80%，但是透析后，失活达到90%。。。。
赞一下 回复此楼
6楼2011-05-12 22:23:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
透析是怎么操作的，包括很多原料
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-05-13 18:53:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinyaolu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-13 18:53:57:
透析是怎么操作的，包括很多原料

缓冲液加了10%甘油，20mM的tris-hcl，ph7.0，,4℃
赞一下 回复此楼
8楼2011-05-14 10:57:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

你可以试一下脱盐柱吗？Sephadex G25之类的。

看样子你的透析液没什么问题，是不是透析袋的孔径太大，蛋白质跑出去了？就剩下10%在袋子里也太可怕了。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-05-14 16:23:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牛小包

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-11 02:07:58
有的蛋白质就是对乙醇和硫酸铵敏感，就像我的蛋白质一样，如果用乙醇去沉淀，加了9倍体积之后产生的沉淀只有80%的目标蛋白质；如果用硫酸铵，在50%饱和度下不会沉淀，但从60%到100%时每个梯度下都有沉淀，随饱和度增 ...

请问异丙醇沉淀蛋白后，蛋白还能复性吗
赞一下 回复此楼
10楼2018-11-26 10:23:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xinyaolu 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +10 小刘同学吖吖 2026-04-06 11/550 2026-04-06 14:54 by 尚水阁主
[考研] 308求调剂 +13 倘若起风了呢 2026-04-05 13/650 2026-04-06 14:20 by 蒋皓禹
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +12 lyz0427 2026-04-03 12/600 2026-04-06 06:37 by houyaoxu
[考研] （调剂）一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 7/350 2026-04-05 22:31 by dongzh2009
[考研] 0854电子信息319求调剂（接受跨专业调剂） +3 星星不眨眼喽 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:20 by 啵啵啵0119
[考研] 求调剂求调剂 +8 121. 2026-04-02 8/400 2026-04-05 20:15 by lys0704
[考研] 计算机11408，286分求调剂 +7 木子念晞 2026-04-05 7/350 2026-04-05 19:02 by chy09050039
[考研] 一志愿同济大学323分（080500）求调剂 +8 yikeniu 2026-04-01 8/400 2026-04-05 18:15 by cql1109
[考研] 求调剂 +3 小沢 2026-04-03 3/150 2026-04-05 09:10 by sihailian3
[考研] 一志愿沪985，326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[考研] 抱歉 +5 田洪有 2026-03-30 5/250 2026-04-03 10:24 by linyelide
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:49 by liumengping
[考研] 一志愿北京科技，085601总分305求调剂 +9 半生瓜！ 2026-04-01 11/550 2026-04-02 08:28 by Wang200018
[考研] 350求调剂 +7 阿佳～ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 16:12 by yanflower7133
[考研] 0703一志愿南师大334求调剂 +4 seven7yu 2026-03-30 4/200 2026-04-01 16:10 by oooqiao
[硕博家园] 考研调剂 +5 骆驼男人 2026-04-01 5/250 2026-04-01 14:28 by syjjj0321
[考研] 267求调剂 +13 uiybh 2026-03-31 13/650 2026-04-01 10:25 by 探123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭