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xinyaolu

木虫 (小有名气)

[求助] 如何在沉淀过程中保护蛋白

本人目前在做一个蛋白的纯化,在前处理浓缩的时候,发现乙醇和硫酸铵沉淀后全部失活,请问各位,该加些什么保护剂才能使蛋白稳定(浓度如何),蛋白含有一个铁离子,1-3个二硫键
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

你可以试一下脱盐柱吗?Sephadex G25之类的。

看样子你的透析液没什么问题,是不是透析袋的孔径太大,蛋白质跑出去了?就剩下10%在袋子里也太可怕了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-05-14 16:23:04
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以使用上海生工代理的国外产品OrgoSol-PROTEIN-Concentrate™
活性保持型蛋白沉淀式浓缩试剂盒(786-125)
3楼2011-05-10 13:56:48
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德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

【答案】应助回帖

你蛋白失活很可能是氧化造成的,加点DTT试试,浓度0.5mM。
我用我有限的青春等你的回心转意!
4楼2011-05-10 18:28:44
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 感谢交流,欢迎常来 2011-05-11 18:38:37
silicare(EPI+1): 2011-05-13 18:26:54
有的蛋白质就是对乙醇和硫酸铵敏感,就像我的蛋白质一样,如果用乙醇去沉淀,加了9倍体积之后产生的沉淀只有80%的目标蛋白质;如果用硫酸铵,在50%饱和度下不会沉淀,但从60%到100%时每个梯度下都有沉淀,随饱和度增大而增多,但最终得率只有50%不到。后来用异丙醇沉淀,加了9倍体积异丙醇之后得率100%,好得太多了。实在不行就换一种沉淀方法吧。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-05-11 02:07:58
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