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xinyaolu

木虫 (小有名气)

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[求助] 如何在沉淀过程中保护蛋白

本人目前在做一个蛋白的纯化，在前处理浓缩的时候，发现乙醇和硫酸铵沉淀后全部失活，请问各位，该加些什么保护剂才能使蛋白稳定（浓度如何），蛋白含有一个铁离子，1-3个二硫键

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1楼 2011-05-09 20:48:40

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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 感谢交流，欢迎常来 2011-05-11 18:38:37
silicare(EPI+1): 2011-05-13 18:26:54

有的蛋白质就是对乙醇和硫酸铵敏感，就像我的蛋白质一样，如果用乙醇去沉淀，加了9倍体积之后产生的沉淀只有80%的目标蛋白质；如果用硫酸铵，在50%饱和度下不会沉淀，但从60%到100%时每个梯度下都有沉淀，随饱和度增大而增多，但最终得率只有50%不到。后来用异丙醇沉淀，加了9倍体积异丙醇之后得率100%，好得太多了。实在不行就换一种沉淀方法吧。