| 查看: 6759 | 回复: 11 | ||||
[求助]
蛋白质纯化中硫酸铵沉淀后沉淀溶解的问题
|
||||
|
本人在做天然蛋白质的纯化。第一步采用硫酸铵分级沉淀。30%饱和硫酸铵沉淀中确定有目的蛋白。问题一：我打算过根离子交换柱，要用柠檬酸盐缓冲液溶解沉淀，但是缓冲液无法将沉淀完全溶解，我将不溶的蛋白离心去除，上清用来上样，但是很快又会出沉淀。有什么解决办法？问题二：考虑到可能是盐没有除干净，我打算把离子柱换成疏水柱，就用1M硫酸铵来溶解沉淀，但是仍然无法完全溶解。我想是不是1M硫酸铵加进去，会使一部分蛋白再次沉淀，所以无法溶解。但是如果硫酸铵浓度再低的话，就会挂不上柱子。教科书说硫酸铵沉淀后适合上疏水柱，但是我实际操作并不是这样，为什么?我用的辛基疏水柱。还有，我暂时不考虑透析和超滤方法。 谢谢。第一次发贴，希望有经验的高手帮助。 |
回复此楼» 猜你喜欢
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有111人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白质的Ni柱纯化问题
已经有23人回复
- 蛋白质除盐纯化的问题
已经有14人回复
- 关于蛋白质纯化柱子的问题
已经有9人回复
- 分离纯化酶，硫酸铵沉淀后透析用什么样的透析袋
已经有5人回复
- 求助硫酸铵沉淀蛋白质的问题
已经有12人回复
- 去污剂在蛋白纯化中的作用
已经有4人回复
- 硫酸铵分级沉淀，不同饱和度组分中蛋白质沉淀的分子量范围是怎么样的?
已经有5人回复
- 硫酸铵沉淀蛋白质
已经有3人回复
- 硫酸铵沉淀蛋白质
已经有16人回复
- 【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】为什么蛋白质盐析中常用的硫酸铵为中性盐？
已经有11人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
2楼2013-07-17 00:19:50
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
8楼2013-07-17 22:48:59
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 11:57:53
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 11:57:53
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2013-07-17 10:01:18
4楼2013-07-17 10:54:58
5楼2013-07-17 10:58:30
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-21 08:10:17
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-21 08:10:17
|
疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团，我们把这些疏水性基团称为疏水补丁，疏水补丁可以与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而结合。不同的分子由于疏水性不同，它们与疏水性层析介质之间的疏水性作用力强弱不同，疏水作用层析就是依据这一原理分离纯化蛋白质和多肽等生物大分子的。疏水作用层析的基本原理如图所示。 溶液中高离子强度可以增强蛋白质和多肽等生物大分子与疏水性层析介质之间的疏水作用。利用这个性质，在高离子强度下将待分离的样品吸附在疏水性层析介质上，然后线性或阶段降低离子强度选择性的将样品解吸。疏水性弱的物质，在较高离子强度的溶液时被洗脱下来，当离子强度降低时，疏水性强的物质才随后被洗脱。 硫酸铵是在溶液中解离成为离子，带有电荷，所以极性强，使得蛋白质的疏水表面与疏水作用层析柱的疏水基团紧密结合到一起，从溶液中被提取出去。 |
6楼2013-07-17 22:37:28
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
7楼2013-07-17 22:41:55
9楼2013-07-18 10:48:18
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
10楼2013-07-18 11:32:56
10