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liuchao_40

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[求助] 去污剂在蛋白纯化中的作用

我现在做的蛋白，无论构建什么标签的，亲和层析后，无论怎样都洗脱不下来，跑胶结果显示蛋白全在介质上。师兄说，下次破菌的时候在BUFFER里加上1%的去污剂，Triton，吐温，NP40都加上。但是我不明白，加上这些有什么作用。有哪位高人，能指点一二？感激不尽啊！

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1楼 2011-09-21 23:52:25

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lhczj

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★
看天(金币+1): 鼓励 2011-09-23 22:21:56

最好把你的信息写全些，如什么蛋白，加的什么标签，采用的层析条件是什么，也许不用加去污剂的。

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2楼2011-09-22 08:32:42

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liuchao_40

新虫 (初入文坛)

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呵呵！我做的是病毒的核衣壳蛋白，就是NP了。pGEX-6P-1,pET-28a载体都构建了，也都纯过。过完GST柱，Ni柱后效果都是一样得，目的蛋白怎么样都是洗脱不下了。取介质跑胶，发现蛋白全在介质上。所以才想加去垢剂。今天加了去垢剂做了，效果还是一样不好。不知道还有没有方法纯这个蛋白？硫酸铵沉淀法有用么？

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3楼2011-09-23 00:33:30

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