24小时热门版块排行榜    

查看: 6420  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

mufeinic

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质纯化中硫酸铵沉淀后沉淀溶解的问题

本人在做天然蛋白质的纯化。第一步采用硫酸铵分级沉淀。30%饱和硫酸铵沉淀中确定有目的蛋白。问题一:我打算过根离子交换柱,要用柠檬酸盐缓冲液溶解沉淀,但是缓冲液无法将沉淀完全溶解,我将不溶的蛋白离心去除,上清用来上样,但是很快又会出沉淀。有什么解决办法?问题二:考虑到可能是盐没有除干净,我打算把离子柱换成疏水柱,就用1M硫酸铵来溶解沉淀,但是仍然无法完全溶解。我想是不是1M硫酸铵加进去,会使一部分蛋白再次沉淀,所以无法溶解。但是如果硫酸铵浓度再低的话,就会挂不上柱子。教科书说硫酸铵沉淀后适合上疏水柱,但是我实际操作并不是这样,为什么?我用的辛基疏水柱。还有,我暂时不考虑透析和超滤方法。
谢谢。第一次发贴,希望有经验的高手帮助。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mufeinic

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-17 00:19:50
我不懂除去盐如果不用超滤和透析,也该用分子筛层析呀,为何要直接上疏水层析?

试验条件限制除盐柱不能用。上疏水柱最初是为了不用除盐
4楼2013-07-17 10:54:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 08:10:10
我不懂除去盐如果不用超滤和透析,也该用分子筛层析呀,为何要直接上疏水层析?
2楼2013-07-17 00:19:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyi05

禁虫 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 11:57:53
本帖内容被屏蔽

3楼2013-07-17 10:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mufeinic

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangyi05 at 2013-07-17 10:01:18
疏水层析不需要除盐,离子层析才需要除盐。不过疏水层析没哟操作过,帮不了你。
楼主看看溶液的PH值是不是合适?

柠檬酸盐溶液PH是 4.5, 1M硫酸铵PH是7.0   这个范围内可以保证我的目的蛋白没问题,但是其他杂蛋白就不知道了。  这两个溶液都是柱子的平衡液,所以PH可改变的空间不大。
5楼2013-07-17 10:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见