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蛋白质纯化中硫酸铵沉淀后沉淀溶解的问题
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本人在做天然蛋白质的纯化。第一步采用硫酸铵分级沉淀。30%饱和硫酸铵沉淀中确定有目的蛋白。问题一:我打算过根离子交换柱,要用柠檬酸盐缓冲液溶解沉淀,但是缓冲液无法将沉淀完全溶解,我将不溶的蛋白离心去除,上清用来上样,但是很快又会出沉淀。有什么解决办法?问题二:考虑到可能是盐没有除干净,我打算把离子柱换成疏水柱,就用1M硫酸铵来溶解沉淀,但是仍然无法完全溶解。我想是不是1M硫酸铵加进去,会使一部分蛋白再次沉淀,所以无法溶解。但是如果硫酸铵浓度再低的话,就会挂不上柱子。教科书说硫酸铵沉淀后适合上疏水柱,但是我实际操作并不是这样,为什么?我用的辛基疏水柱。还有,我暂时不考虑透析和超滤方法。 谢谢。第一次发贴,希望有经验的高手帮助。 |
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4楼2013-07-17 10:54:58
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
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- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
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- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
2楼2013-07-17 00:19:50
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感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 11:57:53
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 11:57:53
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3楼2013-07-17 10:01:18
5楼2013-07-17 10:58:30













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