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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于蛋白质纯化柱子的问题
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本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

两世为人

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白质纯化柱子的问题

CM-Sephadex C-25 离子交换柱 是那种液相用的那种柱子吗 ？还是说买里边的填料自己装到玻璃管内做出来的柱子啊？要是自己买的填料装的是不是可以重复使用？用什么试剂能洗脱干净啊
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向日葵
1楼 2012-06-27 15:07:58
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回帖置顶 ( 共有1个 )

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1 2012-06-29 10:31:02
两世为人: 金币+7, ★★★很有帮助 2012-06-29 12:21:15
这是液相用的填料啊，没问题的。
一般有现成柱子卖的，咨询下GE，基本都是有的，不建议自己装柱子，首先你没有那么高压的装柱机，还有就是咱们装的柱子会让填料压的不均匀，影响后续纯化。
离子交换柱一般是用高盐洗脱的。具体参见：
1．日常清洗
   每次使用后，先用2 – 5 个柱体积的100% B（其中需含1M盐如NaCl）清洗柱子，再用纯水平衡柱子3 – 5柱个体积。
2．每月清洗（使用10次左右，柱子的压力上升，分辨率下降时）
0.3M NaOH 充满一个柱体积，室温放置3-5个小时，再用纯水平衡3-5个柱体积。
基本这么多就差不多了。
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4楼2012-06-29 10:28:40
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普通回帖

秋叶城破

铁杆木虫 (著名写手)
我记得生化实验书里面层析技术章节上有提到这种“离子交换层析技术”
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两世为人
2楼2012-06-27 20:48:20
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
两世为人: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-06-29 12:21:24
自己装的，常压层析系统，用高浓度的NaCl洗脱，可以再生。
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相信自己
3楼2012-06-28 09:09:30
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libaoguo

铁杆木虫 (小有名气)

匆匆过客
你说的就是制备色谱嘛，当然是可以自己装填的。他的要求没有分析型的那么精密
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两世为人
日子，开始充实起来了
5楼2012-06-29 16:39:45
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
层析上用的， 好像不是液相用的啊
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6楼2012-06-29 17:05:30
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两世为人

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by libaoguo at 2012-06-29 16:39:45
你说的就是制备色谱嘛，当然是可以自己装填的。他的要求没有分析型的那么精密

半制备的柱子一般装多高？还有没有加样器装置是不是手动加啊？像过柱子那样液体上样吗？我们实验室只找到了收集器，蠕动泵还有柱子能做多肽初步纯化吗？
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向日葵
7楼2012-06-29 17:22:09
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两世为人

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 秋叶城破 at 2012-06-27 20:48:20
我记得生化实验书里面层析技术章节上有提到这种“离子交换层析技术”

有电子版的吗？我是学药学的，没接触过这个
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向日葵
8楼2012-06-29 17:24:03
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libaoguo

铁杆木虫 (小有名气)

匆匆过客
引用回帖:
7楼: Originally posted by 两世为人 at 2012-06-29 17:22:09
半制备的柱子一般装多高？还有没有加样器装置是不是手动加啊？像过柱子那样液体上样吗？我们实验室只找到了收集器，蠕动泵还有柱子能做多肽初步纯化吗？...

柱子没有固定大小，看你分离的组分是什么了。长径比一般在10左右，有点差异，影响不大。25~40厘米的柱长用得比较多，分离效果不好，可以两根柱子串接起来。
加样能够保证分布效果，什么方式其实无所谓的。固体上样、液体上样；使用进样阀还是进样泵取决于你对分离效果的要求高低。什么装置都没有，因地制宜吧。
有柱子，泵，收集器，就可以做实验了，分批收集，还是比较简单的。其它的成套设备只是在这个基础上变得更简单便利，自动化程度高一点而已。
你要是接一个在线检测最好了，分段收集更直观、方便。
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日子，开始充实起来了
9楼2012-06-29 17:32:14
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秋叶城破

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 两世为人 at 2012-06-29 17:24:03
有电子版的吗？我是学药学的，没接触过这个...

电子书我也没有，可以到生物秀和生物谷这二个网站上看看相关知识，更专业一些，仅个人观点
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10楼2012-06-29 21:38:41
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