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两世为人

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白质纯化柱子的问题

CM-Sephadex C-25 离子交换柱 是那种液相用的那种柱子吗 ?还是说买里边的填料自己装到玻璃管内做出来的柱子啊?要是自己买的填料装的是不是可以重复使用?用什么试剂能洗脱干净啊
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libaoguo

铁杆木虫 (小有名气)

匆匆过客

引用回帖:
7楼: Originally posted by 两世为人 at 2012-06-29 17:22:09
半制备的柱子一般装多高?还有没有加样器装置是不是手动加啊?像过柱子那样液体上样吗?我们实验室只找到了收集器,蠕动泵还有柱子能做多肽初步纯化吗?...

柱子没有固定大小,看你分离的组分是什么了。长径比一般在10左右,有点差异,影响不大。25~40厘米的柱长用得比较多,分离效果不好,可以两根柱子串接起来。
加样能够保证分布效果,什么方式其实无所谓的。固体上样、液体上样;使用进样阀还是进样泵取决于你对分离效果的要求高低。什么装置都没有,因地制宜吧。
有柱子,泵,收集器,就可以做实验了,分批收集,还是比较简单的。其它的成套设备只是在这个基础上变得更简单便利,自动化程度高一点而已。
你要是接一个在线检测最好了,分段收集更直观、方便。
日子,开始充实起来了
9楼2012-06-29 17:32:14
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秋叶城破

铁杆木虫 (著名写手)

我记得生化实验书里面层析技术章节上有提到这种“离子交换层析技术”

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2楼2012-06-27 20:48:20
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
两世为人: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-06-29 12:21:24
自己装的,常压层析系统,用高浓度的NaCl洗脱,可以再生。
相信自己
3楼2012-06-28 09:09:30
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1 2012-06-29 10:31:02
两世为人: 金币+7, ★★★很有帮助 2012-06-29 12:21:15
这是液相用的填料啊,没问题的。
一般有现成柱子卖的,咨询下GE,基本都是有的,不建议自己装柱子,首先你没有那么高压的装柱机,还有就是咱们装的柱子会让填料压的不均匀,影响后续纯化。
离子交换柱一般是用高盐洗脱的。具体参见:
1.日常清洗
   每次使用后,先用2 – 5 个柱体积的100% B(其中需含1M盐如NaCl)清洗柱子,再用纯水平衡柱子3 – 5柱个体积。
2.每月清洗(使用10次左右,柱子的压力上升,分辨率下降时)
0.3M NaOH 充满一个柱体积,室温放置3-5个小时,再用纯水平衡3-5个柱体积。
基本这么多就差不多了。
4楼2012-06-29 10:28:40
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