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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质纯化中硫酸铵沉淀后沉淀溶解的问题
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mufeinic

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质纯化中硫酸铵沉淀后沉淀溶解的问题

本人在做天然蛋白质的纯化。第一步采用硫酸铵分级沉淀。30%饱和硫酸铵沉淀中确定有目的蛋白。问题一：我打算过根离子交换柱，要用柠檬酸盐缓冲液溶解沉淀，但是缓冲液无法将沉淀完全溶解，我将不溶的蛋白离心去除，上清用来上样，但是很快又会出沉淀。有什么解决办法？问题二：考虑到可能是盐没有除干净，我打算把离子柱换成疏水柱，就用1M硫酸铵来溶解沉淀，但是仍然无法完全溶解。我想是不是1M硫酸铵加进去，会使一部分蛋白再次沉淀，所以无法溶解。但是如果硫酸铵浓度再低的话，就会挂不上柱子。教科书说硫酸铵沉淀后适合上疏水柱，但是我实际操作并不是这样，为什么?我用的辛基疏水柱。还有，我暂时不考虑透析和超滤方法。
谢谢。第一次发贴，希望有经验的高手帮助。
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1楼 2013-07-17 00:13:20
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zhangyi05

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 11:57:53
本帖内容被屏蔽
3楼2013-07-17 10:01:18
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 08:10:10
我不懂除去盐如果不用超滤和透析，也该用分子筛层析呀，为何要直接上疏水层析？
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2楼2013-07-17 00:19:50
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mufeinic

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-17 00:19:50
我不懂除去盐如果不用超滤和透析，也该用分子筛层析呀，为何要直接上疏水层析？

试验条件限制除盐柱不能用。上疏水柱最初是为了不用除盐
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4楼2013-07-17 10:54:58
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mufeinic

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangyi05 at 2013-07-17 10:01:18
疏水层析不需要除盐，离子层析才需要除盐。不过疏水层析没哟操作过，帮不了你。
楼主看看溶液的PH值是不是合适？

柠檬酸盐溶液PH是 4.5, 1M硫酸铵PH是7.0   这个范围内可以保证我的目的蛋白没问题，但是其他杂蛋白就不知道了。  这两个溶液都是柱子的平衡液，所以PH可改变的空间不大。
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5楼2013-07-17 10:58:30
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