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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白透析后变成了褐色沉淀
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Earl_zw

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白透析后变成了褐色沉淀

我用的elution buffer: 咪唑1M，Tris-HCl 50mM(PH8.0),Nacl 0.5M.
透析baffer:Tris-HCl 50mM(PH8.0),Nacl 0.1M,DTT 1mM,甘油 10%
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1楼 2013-06-20 10:45:16
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
形成包涵体了，透析buffer不好，要慢慢降低盐浓度
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
2楼2013-06-20 11:01:56
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fhda142

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
透析到后来是很容易出现沉淀，建议你跑个sds-page电泳检测下沉淀，看是否你的目标蛋白。还有你的透析温度，离子强度，有些蛋白会在复性之后又变得不可溶。。。。原因太多了
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3楼2013-06-20 15:40:00
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-20 22:13:01
Earl_zw: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-06 15:03:27
褐色沉淀是NI被还原之后的颜色，因为你蛋白洗脱的时候有些蛋白的标签还结合着NI，在透析的DTT中，NI被还原。你洗脱后的蛋白中补加1mM EDTA，就不会有褐色沉淀了。给金币吧。
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4楼2013-06-20 17:06:56
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Sunshine092

木虫 (小有名气)
想知道这问题具体咋解决的？谢谢!
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5楼2014-05-20 11:34:22
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