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Earl_zw

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白透析后变成了褐色沉淀

我用的elution buffer: 咪唑1M,Tris-HCl 50mM(PH8.0),Nacl 0.5M.
透析baffer:Tris-HCl 50mM(PH8.0),Nacl 0.1M,DTT 1mM,甘油 10%
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fhda142

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
透析到后来是很容易出现沉淀,建议你跑个sds-page电泳检测下沉淀,看是否你的目标蛋白。还有你的透析温度,离子强度,有些蛋白会在复性之后又变得不可溶。。。。原因太多了
3楼2013-06-20 15:40:00
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
形成包涵体了,透析buffer不好,要慢慢降低盐浓度
★穷则独善其身,达则兼济天下★
2楼2013-06-20 11:01:56
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-20 22:13:01
Earl_zw: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-06 15:03:27
褐色沉淀是NI被还原之后的颜色,因为你蛋白洗脱的时候有些蛋白的标签还结合着NI,在透析的DTT中,NI被还原。你洗脱后的蛋白中补加1mM EDTA,就不会有褐色沉淀了。给金币吧。
4楼2013-06-20 17:06:56
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Sunshine092

木虫 (小有名气)

想知道这问题具体咋解决的?谢谢!
5楼2014-05-20 11:34:22
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