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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化怎么去除核酸
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清新夏青

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化怎么去除核酸

最近做的蛋白是个核蛋白，结合核酸特别强，试过核酸酶，但效果不太好，请问有没有大侠知道还有什么去除核酸的办法
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【分子生物】EPI帖 蛋白质生物学实验经验

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1楼 2011-06-30 18:42:54
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-30 21:09:30
清新夏青(金币+3): 2011-07-04 13:19:09
1、根据你的蛋白的性质，选择合适的介质和条件，想办法把蛋白结合在柱子上，（有tag的话用这个方法最好了），然后用高盐（0.5-3M NaCl）洗，一般会洗下来一个峰，就是被洗下来的核酸了。
2、试试在高盐条件下加Mn2+，因为高盐可以让核酸和蛋白分离，而Mn2+对核酸沉淀有一定的效果。
但是要十分小心的是，这类蛋白本身的天然性质就是要结合核酸的，有的时候核酸去除干净了，蛋白也沉淀了，所以没那么容易，很多小条件要结合你的蛋白自己去摸索。
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2楼2011-06-30 19:10:23
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普通回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-01 01:53:26
清新夏青(金币+1): 2011-07-04 13:19:52
哎，忘记了，肝素柱除核酸的效果也不错的，很多专利中提到的核酸酶的纯化，最后一步都会过一下肝素柱。
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3楼2011-06-30 19:12:31
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-01 01:53:36
提取核酸结合蛋白，可以使用肝素琼脂糖柱  BSP093-1  BSP093-2
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4楼2011-06-30 23:27:17
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susanbao

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-07-01 12:51:30
清新夏青(金币+1): 2011-07-04 13:19:47
首先要看你蛋白的来源，如果是细菌表达的话，用肝素柱就有困难，因为细菌缺乏糖基化的功能，Q柱结合核算的能力特别强，除此之外，用聚乙酰亚胺沉淀，也是不错的选择。
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5楼2011-07-01 09:07:06
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chinosaur

木虫 (正式写手)

求购IQ卡
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-05 08:01:25
楼上的，肝素柱是模拟核糖的骨架结构所以才能结合核糖结合蛋白的吧，跟糖基化应该没啥关系啊
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http://www.99zihua.com/images/20100123/56.gifhttp://hi.baidu.com/chinosaur招行充话费：http://shop.cmbchina.com/shop/chonghuafei.aspx
6楼2011-07-05 07:52:13
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wangfengno1

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励第一帖交流。 2011-07-10 17:40:24
加DNase.
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7楼2011-07-10 09:54:36
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y199199

新虫 (初入文坛)
去除核酸的最简单有效快速的办法就是 使用核酸酶 “非限制性核酸酶内切酶” 可以迅速 有效 彻底。该产品有进口和国产的。目前国产的 Biolonase 比较便宜，应该适合您这方面的使用。
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8楼2012-10-23 20:53:19
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indica

铁虫 (初入文坛)
记得罗氏的一篇专利中提到：加至1.5M的NaCl使核酸与蛋白解离，透析后过肝素柱。当时做的是聚合酶
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9楼2013-02-03 16:02:53
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by indica at 2013-02-03 16:02:53
记得罗氏的一篇专利中提到：加至1.5M的NaCl使核酸与蛋白解离，透析后过肝素柱。当时做的是聚合酶

请问这篇专利在哪里？好想看！
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你的日子如何，你的力量也必如何！
10楼2013-06-03 15:03:33
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