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清新夏青

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化怎么去除核酸

最近做的蛋白是个核蛋白，结合核酸特别强，试过核酸酶，但效果不太好，请问有没有大侠知道还有什么去除核酸的办法
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1楼 2011-06-30 18:42:54
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-01 01:53:36
提取核酸结合蛋白，可以使用肝素琼脂糖柱  BSP093-1  BSP093-2
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4楼2011-06-30 23:27:17
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-30 21:09:30
清新夏青(金币+3): 2011-07-04 13:19:09
1、根据你的蛋白的性质，选择合适的介质和条件，想办法把蛋白结合在柱子上，（有tag的话用这个方法最好了），然后用高盐（0.5-3M NaCl）洗，一般会洗下来一个峰，就是被洗下来的核酸了。
2、试试在高盐条件下加Mn2+，因为高盐可以让核酸和蛋白分离，而Mn2+对核酸沉淀有一定的效果。
但是要十分小心的是，这类蛋白本身的天然性质就是要结合核酸的，有的时候核酸去除干净了，蛋白也沉淀了，所以没那么容易，很多小条件要结合你的蛋白自己去摸索。
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2楼2011-06-30 19:10:23
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-01 01:53:26
清新夏青(金币+1): 2011-07-04 13:19:52
哎，忘记了，肝素柱除核酸的效果也不错的，很多专利中提到的核酸酶的纯化，最后一步都会过一下肝素柱。
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3楼2011-06-30 19:12:31
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susanbao

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-07-01 12:51:30
清新夏青(金币+1): 2011-07-04 13:19:47
首先要看你蛋白的来源，如果是细菌表达的话，用肝素柱就有困难，因为细菌缺乏糖基化的功能，Q柱结合核算的能力特别强，除此之外，用聚乙酰亚胺沉淀，也是不错的选择。
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5楼2011-07-01 09:07:06
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