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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于TCA法沉淀蛋白质。。是要怎么操作的呢？
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123456120c

新虫 (小有名气)

[求助] 关于TCA法沉淀蛋白质。。是要怎么操作的呢？

我的目的是除掉蛋白质，用的是TCA沉淀法，操作步骤是：2ml提取液+4ml  22%的TCA盐酸溶液，然后沸水浴中反应40min，然后过滤。请问大家这样操作对吗？如果不对，正确的操作方法是什么呢？我的目的不是获得蛋白质，而是要除去蛋白质。谢谢大家了。。我都快郁闷死了。。
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1楼 2013-09-14 22:35:44
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nogojin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-09-17 06:27:42
100%TCA按照1：10的比例加到样品中4度沉淀1h，离心去掉沉淀。留下你的上清就行。
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2楼2013-09-16 12:13:39
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123456120c

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nogojin at 2013-09-16 12:13:39
100%TCA按照1：10的比例加到样品中4度沉淀1h，离心去掉沉淀。留下你的上清就行。

为什么要4度呢？
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3楼2013-09-17 15:07:39
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shiq250

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-09-19 07:07:05
10%TCA，-20℃沉淀16h以上，15000rpm离心10分钟，弃沉淀。
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4楼2013-09-18 15:44:12
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123456120c

新虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-09-19 07:07:19
引用回帖:
4楼: Originally posted by shiq250 at 2013-09-18 15:44:12
10%TCA，-20℃沉淀16h以上，15000rpm离心10分钟，弃沉淀。

零下20度。。。16小时？？？？有没有搞错啊 = =
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5楼2013-09-18 22:26:12
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shiq250

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 123456120c at 2013-09-18 22:26:12
零下20度。。。16小时？？？？有没有搞错啊 = =...

你看没看过文献啊 基本上都是80%acetone -20摄氏度 16h沉淀的
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6楼2013-09-19 08:48:03
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123456120c

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shiq250 at 2013-09-19 08:48:03
你看没看过文献啊 基本上都是80%acetone -20摄氏度 16h沉淀的...

额  那个条件下是想保持蛋白质的活性？我要的不是蛋白质，单纯是为了除去蛋白质额。。。
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7楼2013-09-19 20:23:57
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shiq250

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 123456120c at 2013-09-19 20:23:57
额  那个条件下是想保持蛋白质的活性？我要的不是蛋白质，单纯是为了除去蛋白质额。。。...

除去蛋白的话 试一试尿素
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8楼2013-09-19 23:14:59
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你就10%TCA，-20℃沉淀16h以上，15000rpm离心10分钟，弃沉淀就行了，
蛋白不就除掉了吗？有没有活性你都弃掉了啊
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9楼2013-09-26 13:11:05
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123456120c

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by DBWJ at 2013-09-26 13:11:05
你就10%TCA，-20℃沉淀16h以上，15000rpm离心10分钟，弃沉淀就行了，
蛋白不就除掉了吗？有没有活性你都弃掉了啊

谢谢你的回复~但是零下20度沉淀16h这个条件对我们来说太难做到了~其实我要做的实验室检测脂质的过氧化情况~检测之前要先除掉里边儿的蛋白质~如果用16h的话，那我的实验数据不知道会不会受到影响呢。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2013-09-27 19:57:22
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