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hrjxx

新虫 (小有名气)

[求助] TCA/丙酮沉淀法提取牛肌肉总蛋白,总是缺失大分量蛋白的原因在哪呢?

我做双向电泳,提了好几次总蛋白,TCA/丙酮沉淀法,每次检测都是没有大分子蛋白,都在40kd以下,量 很多,有哪位大侠知道原因吗??是不是高分子量蛋白,体积大,氨基酸链长,重新溶解比较困难导致的啊???
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江南

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wanhscn(金币+1): 鼓励应助! 2011-11-05 17:02:27
hrjxx(金币+2): 谢谢啊 分层??请问你离心力多大啊?? 2011-11-06 16:08:48
丙酮风干时不要太干了,稍微湿润一点,没有明显分层就可以了,前几天我刚做过……
2楼2011-11-05 00:43:45
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文刀小

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-11-07 21:46:49
hrjxx(金币+1): 谢谢,去除高丰度蛋白,貌似也不错啊 2011-11-10 01:24:56
你可以试试别的蛋白提取方法,裂解液的配方也可以换一下,如果你用超速离心提取的话,其本身就有除高丰度蛋白的作用。
开心每一天
3楼2011-11-07 20:41:41
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cavalier_sun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

裂解液的配方是什么?沉淀后再溶解的配方是什么?
4楼2011-11-08 16:37:32
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主,慎用丙酮TCA法,蛋白丢失在30~50%
组织比细胞难裂解。我记得GE好像有买ep管里面有红色小颗粒的,具体叫啥忘了,里面还配个研磨棒,可以拿去试试。能不用丙酮就不用。
5楼2011-11-08 17:12:11
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zlyshandon

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3464551楼: Originally posted by hrjxx at 2011-11-04 16:16:59
我做双向电泳,提了好几次总蛋白,TCA/丙酮沉淀法,每次检测都是没有大分子蛋白,都在40kd以下,量 很多,有哪位大侠知道原因吗??是不是高分子量蛋白,体积大,氨基酸链长,重新溶解比较困难导致的啊???

你的问题解决了吗,我也遇到相同的问题了,怎么办啊,急求!!!!
6楼2012-10-23 17:00:28
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