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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TCA/丙酮沉淀法提取牛肌肉总蛋白，总是缺失大分量蛋白的原因在哪呢？
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hrjxx

新虫 (小有名气)

[求助] TCA/丙酮沉淀法提取牛肌肉总蛋白，总是缺失大分量蛋白的原因在哪呢？

我做双向电泳，提了好几次总蛋白，TCA/丙酮沉淀法，每次检测都是没有大分子蛋白，都在40kd以下，量 很多，有哪位大侠知道原因吗？？是不是高分子量蛋白，体积大，氨基酸链长，重新溶解比较困难导致的啊？？？
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1楼 2011-11-04 16:16:59
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江南

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-11-05 17:02:27
hrjxx(金币+2): 谢谢啊 分层？？请问你离心力多大啊？？ 2011-11-06 16:08:48
丙酮风干时不要太干了，稍微湿润一点，没有明显分层就可以了，前几天我刚做过……
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2楼2011-11-05 00:43:45
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文刀小

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-11-07 21:46:49
hrjxx(金币+1): 谢谢，去除高丰度蛋白，貌似也不错啊 2011-11-10 01:24:56
你可以试试别的蛋白提取方法，裂解液的配方也可以换一下，如果你用超速离心提取的话，其本身就有除高丰度蛋白的作用。
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开心每一天
3楼2011-11-07 20:41:41
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cavalier_sun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

裂解液的配方是什么？沉淀后再溶解的配方是什么？
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4楼2011-11-08 16:37:32
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主，慎用丙酮TCA法，蛋白丢失在30~50%
组织比细胞难裂解。我记得GE好像有买ep管里面有红色小颗粒的，具体叫啥忘了，里面还配个研磨棒，可以拿去试试。能不用丙酮就不用。
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5楼2011-11-08 17:12:11
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zlyshandon

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3464551楼: Originally posted by hrjxx at 2011-11-04 16:16:59
我做双向电泳，提了好几次总蛋白，TCA/丙酮沉淀法，每次检测都是没有大分子蛋白，都在40kd以下，量 很多，有哪位大侠知道原因吗？？是不是高分子量蛋白，体积大，氨基酸链长，重新溶解比较困难导致的啊？？？

你的问题解决了吗，我也遇到相同的问题了，怎么办啊，急求！！！！
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6楼2012-10-23 17:00:28
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