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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 有人用三氟乙酸沉淀过蛋白吗？浓度要多大？
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sw07

金虫 (正式写手)

[求助] 有人用三氟乙酸沉淀过蛋白吗？浓度要多大？

如题
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1楼 2013-03-28 22:27:20
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wqiangz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
karl2100: 金币+1, 多谢提供！ 2013-04-04 00:13:31
sw07: 金币+10 2013-04-05 15:55:14
一般10%或15%吧，加0.4倍量就可以了，例如，200 μL的血浆，加80 μL的TCA就可以沉淀98%以上的蛋白了。
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2楼2013-04-03 20:05:54
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sw07

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wqiangz at 2013-04-03 20:05:54
一般10%或15%吧，加0.4倍量就可以了，例如，200 μL的血浆，加80 μL的TCA就可以沉淀98%以上的蛋白了。

谢啦，请问10%是指体积比还是重量比？
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3楼2013-04-05 15:55:02
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wqiangz

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sw07 at 2013-04-05 15:55:02
谢啦，请问10%是指体积比还是重量比？...

就是称取1g，用10mL水溶解就可以了，有的时候考虑到回收率的影响，也可以用甲醇或乙腈与水配成一定比例作溶剂。具体操作为：一定量血浆，加0.4倍量TCA，涡旋30s，室温放置10min-30min，在离心取上清进样分析，仅供参考。另外，我曾经用TCA沉血浆蛋白后，在低波长检测220nm左右检测时发现有很大的拖尾现象（我是梯度洗脱，乙腈比例在10%以内时），不知是否具有普遍性，主要是考虑到TCA的羧基较强，若与待测物质以氢键等结合后，可能会影响检测，但在260nm以上是便无干扰，仅供参考。
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4楼2013-04-06 21:07:38
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sw07

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wqiangz at 2013-04-06 21:07:38
就是称取1g，用10mL水溶解就可以了，有的时候考虑到回收率的影响，也可以用甲醇或乙腈与水配成一定比例作溶剂。具体操作为：一定量血浆，加0.4倍量TCA，涡旋30s，室温放置10min-30min，在离心取上清进样分析，仅供 ...

好的，非常感谢～～～可是实验室现有的TCA是液体，所以很纠结10%指体积比还是重量比？还是TCA是液体的时候，就是v/v，固体的时候是w/v？
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5楼2013-04-08 08:10:14
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wqiangz

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sw07 at 2013-04-08 08:10:14
好的，非常感谢～～～可是实验室现有的TCA是液体，所以很纠结10%指体积比还是重量比？还是TCA是液体的时候，就是v/v，固体的时候是w/v？...

TCA 的熔点为57.5℃， 常温下都是固体吧。你用的是TFA（三氟乙酸）吗？若是液体，那就体积比吧。10mlTCA，加90ml的水。
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6楼2013-04-08 16:53:01
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