24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1365  |  回复: 5

小李爱学习

银虫 (正式写手)

[求助] 如何富集沉淀植物(草莓)中的蛋白质? 已有1人参与

小弟我最近要分离纯化草莓果实中的一种水溶性的酶,做预实验的时候用缓冲液与草莓共同打浆破碎,离心取上清液后用硫酸铵沉淀上清液中的蛋白。可能是草莓中蛋白含量很低,所以沉淀效果不好,即使硫酸铵饱和度达到100%,也只能得到很少的沉淀,回收率不到15%。之前也做过分级沉淀,饱和度在60%之前根本没有沉淀,超过60%后沉淀慢慢析出,但量非常少,60-80%、80-100%各组分都有酶的活性。
请教各位有什么方法能够在不引起酶变性的情况下,有效富集沉淀我所需要的酶呢?谢谢!

[ Last edited by 小李爱学习 on 2013-6-8 at 20:28 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-06-10 03:57:52
你一定要用沉淀方法富集该蛋白质?沉淀方法是很粗糙的分离方法,你可用离子交换层析、分子筛层析和亲和层析方法。即使要用沉淀方法,在粗处理时分级分离和超滤浓缩也可以去掉很多的非蛋白质杂质。
2楼2013-06-09 17:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小李爱学习

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-09 17:43:24
你一定要用沉淀方法富集该蛋白质?沉淀方法是很粗糙的分离方法,你可用离子交换层析、分子筛层析和亲和层析方法。即使要用沉淀方法,在粗处理时分级分离和超滤浓缩也可以去掉很多的非蛋白质杂质。

对! 草莓中蛋白含量很低,其他处理之前需要富集。草莓中可溶性固形物含量很好,无法进行超滤浓缩。
3楼2013-06-09 17:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小李爱学习: 金币+3, 有帮助 2013-06-09 18:04:05
wizardfan: 金币+2, 谢谢补充 2013-06-10 03:58:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小李爱学习 at 2013-06-09 17:53:41
对! 草莓中蛋白含量很低,其他处理之前需要富集。草莓中可溶性固形物含量很好,无法进行超滤浓缩。...

可以先用过滤方法除去固体颗粒,再做超滤。分级离心也可以除去很多不溶性颗粒。沉淀也可以用聚乙二醇或者丙酮、凝集素、碱性蛋白质等其他有机试剂,不一定非用硫酸铵。
4楼2013-06-09 17:58:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小李爱学习

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-09 17:58:21
可以先用过滤方法除去固体颗粒,再做超滤。分级离心也可以除去很多不溶性颗粒。沉淀也可以用聚乙二醇或者丙酮、凝集素、碱性蛋白质等其他有机试剂,不一定非用硫酸铵。...

嗯 好 我按照你的方法试试 先过滤 再超滤浓缩试试。
5楼2013-06-09 18:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helpwater

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主您好,请问你这个问题后来怎么解决的。我现在也是遇到了你所说的问题。我的物质也是在100%硫酸铵沉淀的时候还在上清中较多,沉淀中较少,不容易沉淀下来。后来我经过了超低温真空冷冻浓缩的。但是我觉得这个方法还是不够好。楼主是怎么解决的呢?感谢指教。
6楼2017-01-04 16:41:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小李爱学习 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703调剂,一志愿天津大学319分 +8 haaaabcd 2026-04-05 8/400 2026-04-06 06:16 by houyaoxu
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业083200 +4 what张 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:07 by chw1980_0
[考研] 320求调剂 +3 一样圆 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:29 by 啵啵啵0119
[考研] 材料调剂 +15 一样YWY 2026-04-01 15/750 2026-04-04 22:23 by hemengdong
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-03 4/200 2026-04-04 22:17 by hemengdong
[考研] 291求调剂 +4 迷蒙木木 2026-04-01 5/250 2026-04-04 15:59 by sihailian3
[考研] 0856调剂 +8 曲听筠 2026-03-30 8/400 2026-04-04 08:46 by tianyyysss
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
[考研] 273求调剂 +20 李芷新1 2026-03-31 20/1000 2026-04-03 09:58 by linyelide
[考研] 专硕 351 086100 也是考的材科基 本科也是材料 +8 202451007219 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:50 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿山东大学,085600,344 +7 魏子per 2026-04-02 8/400 2026-04-02 21:12 by 百灵童888
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:03 by yulian1987
[考研] 0710生物学,325求调剂 +3 mkkkkkl 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:48 by Jaylen.
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 22:25 by zhouyuwinner
[考研] 一志愿北交材料工程总分358 +5 cs0106 2026-04-01 7/350 2026-04-01 11:45 by wangjy2002
[考研] 358求调剂 +3 王向阳花 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:56 by zzchen2000
[考研] 本2一志愿C9-333分,材料科学与工程,求调剂 +9 升升不降 2026-03-31 9/450 2026-03-31 18:01 by 无际的草原
[考研] 085601 329分调剂 +6 yzsa12 2026-03-31 6/300 2026-03-31 15:23 by yanflower7133
[考研] 313求调剂 +6 卖个关子吧 2026-03-31 6/300 2026-03-31 10:58 by Jaylen.
信息提示
请填处理意见