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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何富集沉淀植物（草莓）中的蛋白质？
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小李爱学习

银虫 (正式写手)

[求助] 如何富集沉淀植物（草莓）中的蛋白质？ 已有1人参与

小弟我最近要分离纯化草莓果实中的一种水溶性的酶，做预实验的时候用缓冲液与草莓共同打浆破碎，离心取上清液后用硫酸铵沉淀上清液中的蛋白。可能是草莓中蛋白含量很低，所以沉淀效果不好，即使硫酸铵饱和度达到100%，也只能得到很少的沉淀，回收率不到15%。之前也做过分级沉淀，饱和度在60%之前根本没有沉淀，超过60%后沉淀慢慢析出，但量非常少，60-80%、80-100%各组分都有酶的活性。
请教各位有什么方法能够在不引起酶变性的情况下，有效富集沉淀我所需要的酶呢？谢谢！

[ Last edited by 小李爱学习 on 2013-6-8 at 20:28 ]
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1楼 2013-06-08 20:13:21
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-06-10 03:57:52
你一定要用沉淀方法富集该蛋白质？沉淀方法是很粗糙的分离方法，你可用离子交换层析、分子筛层析和亲和层析方法。即使要用沉淀方法，在粗处理时分级分离和超滤浓缩也可以去掉很多的非蛋白质杂质。
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2楼2013-06-09 17:43:24
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小李爱学习

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-09 17:43:24
你一定要用沉淀方法富集该蛋白质？沉淀方法是很粗糙的分离方法，你可用离子交换层析、分子筛层析和亲和层析方法。即使要用沉淀方法，在粗处理时分级分离和超滤浓缩也可以去掉很多的非蛋白质杂质。

对! 草莓中蛋白含量很低，其他处理之前需要富集。草莓中可溶性固形物含量很好，无法进行超滤浓缩。
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3楼2013-06-09 17:53:41
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小李爱学习: 金币+3, ★有帮助 2013-06-09 18:04:05
wizardfan: 金币+2, 谢谢补充 2013-06-10 03:58:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小李爱学习 at 2013-06-09 17:53:41
对! 草莓中蛋白含量很低，其他处理之前需要富集。草莓中可溶性固形物含量很好，无法进行超滤浓缩。...

可以先用过滤方法除去固体颗粒，再做超滤。分级离心也可以除去很多不溶性颗粒。沉淀也可以用聚乙二醇或者丙酮、凝集素、碱性蛋白质等其他有机试剂，不一定非用硫酸铵。
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4楼2013-06-09 17:58:21
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小李爱学习

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-09 17:58:21
可以先用过滤方法除去固体颗粒，再做超滤。分级离心也可以除去很多不溶性颗粒。沉淀也可以用聚乙二醇或者丙酮、凝集素、碱性蛋白质等其他有机试剂，不一定非用硫酸铵。...

嗯 好 我按照你的方法试试 先过滤 再超滤浓缩试试。
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5楼2013-06-09 18:03:56
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helpwater

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主您好，请问你这个问题后来怎么解决的。我现在也是遇到了你所说的问题。我的物质也是在100%硫酸铵沉淀的时候还在上清中较多，沉淀中较少，不容易沉淀下来。后来我经过了超低温真空冷冻浓缩的。但是我觉得这个方法还是不够好。楼主是怎么解决的呢？感谢指教。
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6楼2017-01-04 16:41:25
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