24小时热门版块排行榜    

查看: 1210  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小李爱学习

铜虫 (正式写手)

[求助] 如何富集沉淀植物(草莓)中的蛋白质? 已有1人参与

小弟我最近要分离纯化草莓果实中的一种水溶性的酶,做预实验的时候用缓冲液与草莓共同打浆破碎,离心取上清液后用硫酸铵沉淀上清液中的蛋白。可能是草莓中蛋白含量很低,所以沉淀效果不好,即使硫酸铵饱和度达到100%,也只能得到很少的沉淀,回收率不到15%。之前也做过分级沉淀,饱和度在60%之前根本没有沉淀,超过60%后沉淀慢慢析出,但量非常少,60-80%、80-100%各组分都有酶的活性。
请教各位有什么方法能够在不引起酶变性的情况下,有效富集沉淀我所需要的酶呢?谢谢!

[ Last edited by 小李爱学习 on 2013-6-8 at 20:28 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小李爱学习

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-09 17:43:24
你一定要用沉淀方法富集该蛋白质?沉淀方法是很粗糙的分离方法,你可用离子交换层析、分子筛层析和亲和层析方法。即使要用沉淀方法,在粗处理时分级分离和超滤浓缩也可以去掉很多的非蛋白质杂质。

对! 草莓中蛋白含量很低,其他处理之前需要富集。草莓中可溶性固形物含量很好,无法进行超滤浓缩。
3楼2013-06-09 17:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小李爱学习

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-09 17:58:21
可以先用过滤方法除去固体颗粒,再做超滤。分级离心也可以除去很多不溶性颗粒。沉淀也可以用聚乙二醇或者丙酮、凝集素、碱性蛋白质等其他有机试剂,不一定非用硫酸铵。...

嗯 好 我按照你的方法试试 先过滤 再超滤浓缩试试。
5楼2013-06-09 18:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小李爱学习 的主题更新
信息提示
请填处理意见