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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 沉淀蛋白的方法？
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farther1990

铜虫 (初入文坛)

[求助] 沉淀蛋白的方法？已有4人参与

我使用荧光配体和受体结合，受体溶解在去污剂中，现在想通过沉淀蛋白，测定游离配体浓度。各位虫友有没有相关经验，求指教！用什么物质来沉淀这个蛋白，还保持蛋白的活性。有相关文献的推荐也行哦~
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不以物喜，不以己悲
1楼2014-02-24 16:55:10
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farther1990

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-24 17:18:27
...
    我能想到的只有硝酸铵........................................

谢谢哦~
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不以物喜，不以己悲
3楼2014-02-24 19:44:00
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farther1990

铜虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 10:24:20
1、硫酸铵沉淀，抗体浓缩就用这个方法
2、分子筛离心柱过滤浓缩蛋白质

主要是想通过沉淀，最后离心，得到最后得到滤液。因为样品量极少，就100ul0.1mg蛋白，我怕普通方法无法完全使蛋白沉淀。尝试使用过30%PEG6000,并没有看到有沉淀形成。很是苦恼啊，我想问下是不是因为我是膜蛋白，里面用去污剂溶解了，所以导致不能沉淀啊？
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不以物喜，不以己悲
8楼2014-02-25 14:30:27
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farther1990

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 15:31:48
1 mg/ml的浓度已经不低了，有些去污剂能使蛋白质变性（比如SDS）。
如果不考虑蛋白变性，很容易沉淀。
其它的不知道。...

就是想保持不变性，然后又能充分沉淀哦
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不以物喜，不以己悲
10楼2014-02-25 18:07:18
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farther1990

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by chengjg at 2014-02-26 10:30:14
http://muchong.com/html/200905/1357791.html
可以看看这个，对你有帮助滴

非常感谢哦
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不以物喜，不以己悲
12楼2014-02-26 22:16:31
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