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糖泡泡

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白超滤有沉淀

蛋白纯化过程中通过超滤一方面可以浓缩蛋白样品，另一方面可以除盐，但是在超滤过程中总会有蛋白沉淀出来，大家有没有遇到过类似问题，这是由于什么原因造成的？会对蛋白活性造成影响吗？怎么解决？非常感谢！
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1楼 2012-12-20 20:46:35
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mguo15

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-21 13:50:53
糖泡泡: 金币+3 2012-12-22 15:48:26
这是普遍现象，主要是浓度增加，和超滤时的搅拌引起。这一现象会引起活力的损失。加盐有改善，但你要除盐。如果无盐的样品可以放透析袋吹干浓缩，或用高聚PEG反渗透。
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2楼2012-12-21 11:21:37
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糖泡泡

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mguo15 at 2012-12-21 11:21:37
这是普遍现象，主要是浓度增加，和超滤时的搅拌引起。这一现象会引起活力的损失。加盐有改善，但你要除盐。如果无盐的样品可以放透析袋吹干浓缩，或用高聚PEG反渗透。

谢谢了，可是我遇到的情况是还没有更换缓冲就出现沉淀，而且超滤时我的蛋白浓度很低，不到1mg/ml，以前纯化蛋白量大时有的管就可以收集到5 mg/ml也不会出现沉淀。我现在遇到的问题时只要一超滤就有沉淀，不知道这是为什么
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3楼2012-12-22 15:52:29
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mguo15

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个是不一样的，蛋白沉淀跟浓度没有关系，与蛋白自身的性质有关。曾经有人将毫克级能沉淀的蛋白，按我说的浓缩到几百毫克的澄清液。当然，如果是膜蛋白的话，也是容易变性的。如果你能告诉你的蛋白名称，可能我的回答跟能满足你的需求。有些蛋白如有底物、配体，也会起到稳定作用。主要看你的目的而定，一般情况，纯蛋白容易变性。这也是核酸酶加BSA的原因。
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4楼2012-12-25 09:15:40
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