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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求替代超滤浓缩的蛋白的方法
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月落星沉

银虫 (初入文坛)

[求助] 求替代超滤浓缩的蛋白的方法

各位虫友有没有什么好的浓缩蛋白的方法？
我需要将发酵液，体积大约1~2L，浓缩到几十毫升左右，然后上柱子，分离纯化蛋白。
之前用的是millipore的超滤杯和配套的聚醚砜膜，但是现在以前师兄剩下的膜用完了，询问试剂公司说millipore聚醚砜材料的那种膜停产了，只有纤维素材质的膜，但这种纤维素膜似乎不适合浓缩浓度较大的蛋白溶液（我的蛋白浓缩后大概能达到4~5mg/ml的浓度）。
之前还试过盐析的方法替代，但不知道为什么，透析除盐的时候，透析袋总是很容易就破了（像是被溶解了似的，透析2天后，看着好好的，轻轻一碰就破掉了），白白损失了很多酶。
不知各位有没有什么好的适合我这种情况的浓缩蛋白的方法，或者知道有其他什么品牌质量好的聚醚砜材质的超滤膜.
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1楼 2012-11-27 21:08:06
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liaoshibo

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
月落星沉: 金币+2, ★有帮助, 对这方面操作不熟悉，貌似后续会有更换缓冲液的麻烦，不过也是一种方法 2012-11-29 10:48:50
超滤最方便。试试萃取，自己设计找适合的萃取剂。
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月落星沉
我就是我，你也是你。勿模仿，自超越。
2楼2012-11-27 21:57:21
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月落星沉

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by liaoshibo at 2012-11-27 21:57:21
超滤最方便。试试萃取，自己设计找适合的萃取剂。

萃取液可以浓缩吗？是不是要用到有机试剂，那上柱子之前要怎么置换缓冲液呢？
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3楼2012-11-27 22:17:00
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月落星沉

银虫 (初入文坛)
自己顶，求回复
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4楼2012-11-27 23:33:47
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happybenny

铁杆木虫 (正式写手)
冷冻干燥如何，但我没有做过，不知道细节怎么做，呵呵。
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月落星沉
5楼2012-11-28 08:48:36
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月落星沉

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by happybenny at 2012-11-28 08:48:36
冷冻干燥如何，但我没有做过，不知道细节怎么做，呵呵。

冻干我也试过，不过貌似我的初始体积大了些，冻干结束后冻干机里结了厚厚的一层冰，花了2天才化掉，搞得管冻干机的老师一脸怨念的看着我。
而且冻干后所有的杂志还在干粉里，我上柱子前还是要用缓冲液溶解，里面可能有多糖类的物质，加缓冲液少的话，溶液时黏黏的，上柱子堵；多加些缓冲液吧，又达不到所希望的体积了。
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6楼2012-11-28 09:12:59
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happybenny

铁杆木虫 (正式写手)
哦 还有一种方法，先买个脱盐柱来试试看，但是估计不符合你的1-2L的体积，太大了。
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7楼2012-11-29 09:04:29
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happybenny

铁杆木虫 (正式写手)
你可以到一些生物论坛上专门做蛋白的版块问一下，那里蛋白纯化的高手多。
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8楼2012-11-29 09:06:13
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laoboshihou

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
millipore的超最方便。可否考虑用真空干燥的方法，用离心机干燥的方法。
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月落星沉
9楼2012-11-29 09:33:25
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zq347597638

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
月落星沉: 金币+15, ★★★很有帮助, 正在尝试，最终结果还没出来，不过貌似可行 2012-12-01 14:33:25
买个好的透析袋，用蔗糖或者聚乙二醇覆盖在上面快速吸水  处理  （蔗糖烘干后可以反复使用）
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月落星沉
10楼2012-11-29 10:44:13
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