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月落星沉

银虫 (初入文坛)

[求助] 求替代超滤浓缩的蛋白的方法

各位虫友有没有什么好的浓缩蛋白的方法?
我需要将发酵液,体积大约1~2L,浓缩到几十毫升左右,然后上柱子,分离纯化蛋白。
之前用的是millipore的超滤杯和配套的聚醚砜膜,但是现在以前师兄剩下的膜用完了,询问试剂公司说millipore聚醚砜材料的那种膜停产了,只有纤维素材质的膜,但这种纤维素膜似乎不适合浓缩浓度较大的蛋白溶液(我的蛋白浓缩后大概能达到4~5mg/ml的浓度)。
之前还试过盐析的方法替代,但不知道为什么,透析除盐的时候,透析袋总是很容易就破了(像是被溶解了似的,透析2天后,看着好好的,轻轻一碰就破掉了),白白损失了很多酶。
不知各位有没有什么好的适合我这种情况的浓缩蛋白的方法,或者知道有其他什么品牌质量好的聚醚砜材质的超滤膜.
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liaoshibo

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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月落星沉: 金币+2, 有帮助, 对这方面操作不熟悉,貌似后续会有更换缓冲液的麻烦,不过也是一种方法 2012-11-29 10:48:50
超滤最方便。试试萃取,自己设计找适合的萃取剂。

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我就是我,你也是你。勿模仿,自超越。
2楼2012-11-27 21:57:21
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月落星沉

银虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by liaoshibo at 2012-11-27 21:57:21
超滤最方便。试试萃取,自己设计找适合的萃取剂。

萃取液可以浓缩吗?是不是要用到有机试剂,那上柱子之前要怎么置换缓冲液呢?
3楼2012-11-27 22:17:00
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月落星沉

银虫 (初入文坛)

自己顶,求回复
4楼2012-11-27 23:33:47
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happybenny

铁杆木虫 (正式写手)

冷冻干燥如何,但我没有做过,不知道细节怎么做,呵呵。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2012-11-28 08:48:36
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月落星沉

银虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by happybenny at 2012-11-28 08:48:36
冷冻干燥如何,但我没有做过,不知道细节怎么做,呵呵。

冻干我也试过,不过貌似我的初始体积大了些,冻干结束后冻干机里结了厚厚的一层冰,花了2天才化掉,搞得管冻干机的老师一脸怨念的看着我。
而且冻干后所有的杂志还在干粉里,我上柱子前还是要用缓冲液溶解,里面可能有多糖类的物质,加缓冲液少的话,溶液时黏黏的,上柱子堵;多加些缓冲液吧,又达不到所希望的体积了。
6楼2012-11-28 09:12:59
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happybenny

铁杆木虫 (正式写手)

哦 还有一种方法,先买个脱盐柱来试试看,但是估计不符合你的1-2L的体积,太大了。
7楼2012-11-29 09:04:29
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happybenny

铁杆木虫 (正式写手)

你可以到一些生物论坛上专门做蛋白的版块问一下,那里蛋白纯化的高手多。
8楼2012-11-29 09:06:13
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laoboshihou

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
millipore的超最方便。可否考虑用真空干燥的方法,用离心机干燥的方法。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2012-11-29 09:33:25
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zq347597638

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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月落星沉: 金币+15, ★★★很有帮助, 正在尝试,最终结果还没出来,不过貌似可行 2012-12-01 14:33:25
买个好的透析袋,用蔗糖或者聚乙二醇覆盖在上面快速吸水  处理  (蔗糖烘干后可以反复使用)

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

10楼2012-11-29 10:44:13
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