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cs99900810
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2楼2013-03-23 10:38:44
cs99900810
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zy99900810
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cs99900810
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cs99900810
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【答案】应助回帖
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zy99900810: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-03-24 09:17:54
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方法一 超速离心沉淀法 1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。 2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。 3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。 4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。 5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。 6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。 7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。 8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。 9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。 10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。 11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。 12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。 13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。 方法二 PEG-8000浓缩法 1. 5X PEG8000+NaCl配制 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃。 2. 使用0.45μm滤头过滤慢病毒上清液； 3. 每30ml过滤后的病毒初始液，加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml； 4. 每20～30min混合一次，共进行3-5次； 5. 4度放置过夜； 6. 4度，4000 g，离心 20min； 7. 吸弃上清，静置管子1～2分钟，吸走残余液体； 8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀； 9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃ |
6楼2013-03-23 18:19:13
7楼2013-06-28 10:47:25
