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超滤浓缩后蛋白失去活性
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我是用ConA-Sepharose4B分离纯化的酶， 因为洗脱后酶液中含有较高浓度的Nacl（0.5 M）和甲基甘露糖苷（0.4 M）所以用超滤管进行了浓缩与缓冲液更换，结果酶活消失了。这个酶是蔗糖转化酶，具有一定比例的糖链。 具体操作是： 1、洗脱酶液用超滤管浓缩。 2、将浓缩酶液加入到新的超滤管，加0.05M Tris-Hcl 7.1的再进行超滤浓缩，这一步相当与将Nacl和甲基甘露糖苷稀释后又将酶进行浓缩。 3、结果再测酶活，发现没有活性了。 已经出现过两次这样的事情了！ 我用超滤浓缩管原本是为了方便、快捷，没想到会有这样的情况，我每次都是用新的浓缩管，管子是密理博的，以前别的试验用过从没出现这种问题，我认为管子的质量是没问题的。 我认为有可能是超滤管上的膜把酶吸附了或者是有别的原因。我现在已经准备用透析了。 请各位大家帮忙分析下原因？或者有没有其他的更换缓冲液的方法和浓缩方法？ 谢谢各位牛！ |
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