| 查看: 2397 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
超滤浓缩后蛋白失去活性
|
||
|
我是用ConA-Sepharose4B分离纯化的酶， 因为洗脱后酶液中含有较高浓度的Nacl（0.5 M）和甲基甘露糖苷（0.4 M）所以用超滤管进行了浓缩与缓冲液更换，结果酶活消失了。这个酶是蔗糖转化酶，具有一定比例的糖链。 具体操作是： 1、洗脱酶液用超滤管浓缩。 2、将浓缩酶液加入到新的超滤管，加0.05M Tris-Hcl 7.1的再进行超滤浓缩，这一步相当与将Nacl和甲基甘露糖苷稀释后又将酶进行浓缩。 3、结果再测酶活，发现没有活性了。 已经出现过两次这样的事情了！ 我用超滤浓缩管原本是为了方便、快捷，没想到会有这样的情况，我每次都是用新的浓缩管，管子是密理博的，以前别的试验用过从没出现这种问题，我认为管子的质量是没问题的。 我认为有可能是超滤管上的膜把酶吸附了或者是有别的原因。我现在已经准备用透析了。 请各位大家帮忙分析下原因？或者有没有其他的更换缓冲液的方法和浓缩方法？ 谢谢各位牛！ |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有212人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白质浓缩呈淡黄色怎么去除
已经有5人回复
- 关于超滤后絮状物的问题？
已经有5人回复
- 跪求超滤法浓缩病毒的产品！！！！
已经有6人回复
- 蛋白保存 冻融后沉淀
已经有11人回复
- 蛋白超滤有沉淀
已经有3人回复
- 请问有谁用过millipore的超滤管？
已经有15人回复
- 求替代超滤浓缩的蛋白的方法
已经有21人回复
- 大家用过什么好的浓缩蛋白的方法？蛋白溶液有 30ml
已经有52人回复
- 蛋白原液超滤浓缩后发生沉淀
已经有9人回复
- 蛋白浓度过低，无法做WB,如何进行蛋白浓缩？
已经有18人回复
- 蛋白浓缩沉淀？二硫键？
已经有9人回复
- 43KDa的蛋白用截留分子量10KDa的聚醚砜膜超滤，蛋白为什么会透过去呢？
已经有18人回复
- 蛋白溶液浓缩后考染结果，我还应注意哪些？
已经有3人回复
- 聚乙二醇浓缩蛋白对蛋白的影响
已经有13人回复
- 蛋白质电泳时浓缩胶浓度是如何选取的？
已经有7人回复
- 【交流】超滤膜截留率表征牛血清蛋白
已经有9人回复
- 【求助/交流】纯化后的蛋白浓缩后形成大量沉淀
已经有13人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】求高效的沉淀浓缩蛋白质的方法
已经有4人回复
4楼2013-12-04 13:16:09
2楼2013-12-03 16:23:18
3楼2013-12-03 17:00:24
5楼2015-02-11 10:58:17
