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0620602

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白溶液浓缩后考染结果,我还应注意哪些?

Protocol:
1.将蛋白样品沸水煮3min,混匀后离心,取250μL,加入-20℃预冷的丙酮1mL,-20℃冰箱静置3h。
2.-4℃离心(12000r/min)20min,弃上清(直接倒掉)。
3.200μL丙酮洗涤沉淀2次。
4.室温静置风干25min。
5.加入裂解buffer 20μL,votex,室温静置2min,加入5μL loading buffer,沸水煮3min。
6.12000r/min离心1min,上样,电泳,考染。


protocol还有哪些应该改进的地方?


考染结果
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gzh494266

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+3): 鼓励新虫积极应助哦 2012-01-14 08:33:37
蛋白质样品怎么会煮沸!不理解~~不是全过程都要求在冰上操作吗?
我实验流程是:
裂细胞
提蛋白(提蛋白有你上面部分丙酮沉淀的过程)
电泳
考染看结果
你上面所说的只是丙酮沉淀的过程。并且你这个煮沸我个人觉得完全有问题。。这一系列操作都必须在4℃,即冰上操作。
静心
2楼2012-01-13 19:05:38
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痴客

木虫 (正式写手)

吃货250

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
marker是哪个?对照嘛?说一下上样量是多少?你应该用的也是小板跑得吧,还有电压,是连续的SDS-PAGE还是非连续的,说清楚了才能看出哪里需要改进
因为这个世界上这么多的狼,我这只牧羊犬只好放弃我的温顺,向着这个世界放出最耀眼的光。
3楼2012-01-14 01:14:07
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fishbirdchu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
风干之后,我们一般做的话用50mMTris-Hci溶解,之后取样加入loading buffer。煮样5min,之后上样。
4楼2012-03-01 13:15:32
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