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0620602

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白溶液浓缩后考染结果，我还应注意哪些？

Protocol：
1.将蛋白样品沸水煮3min，混匀后离心，取250μL，加入-20℃预冷的丙酮1mL，-20℃冰箱静置3h。
2.-4℃离心（12000r/min）20min，弃上清（直接倒掉）。
3.200μL丙酮洗涤沉淀2次。
4.室温静置风干25min。
5.加入裂解buffer 20μL，votex，室温静置2min，加入5μL loading buffer，沸水煮3min。
6.12000r/min离心1min，上样，电泳，考染。

protocol还有哪些应该改进的地方？

考染结果
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1楼 2011-12-23 10:20:24
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gzh494266

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+3): 鼓励新虫积极应助哦 2012-01-14 08:33:37
蛋白质样品怎么会煮沸！不理解~~不是全过程都要求在冰上操作吗？
我实验流程是：
裂细胞
提蛋白（提蛋白有你上面部分丙酮沉淀的过程）
电泳
考染看结果
你上面所说的只是丙酮沉淀的过程。并且你这个煮沸我个人觉得完全有问题。。这一系列操作都必须在4℃，即冰上操作。
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静心
2楼2012-01-13 19:05:38
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痴客

木虫 (正式写手)

吃货250

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker是哪个？对照嘛？说一下上样量是多少？你应该用的也是小板跑得吧，还有电压，是连续的SDS-PAGE还是非连续的，说清楚了才能看出哪里需要改进
赞一下 回复此楼
因为这个世界上这么多的狼，我这只牧羊犬只好放弃我的温顺，向着这个世界放出最耀眼的光。
3楼2012-01-14 01:14:07
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fishbirdchu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
风干之后，我们一般做的话用50mMTris-Hci溶解，之后取样加入loading buffer。煮样5min，之后上样。
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4楼2012-03-01 13:15:32
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