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xylem

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白浓度过低,无法做WB,如何进行蛋白浓缩?

急着做完WB毕业,但提取蛋白的浓度太低,重新采样提蛋白已经不大可能,求高手指点蛋白经济,可靠的蛋白浓缩方法,最好附上具体的步骤。谢谢

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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

蛋白存放在裂解液里也很容易降解的

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8楼2012-09-13 19:55:06
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
以前我用透析袋做过浓缩,但是你的样品估计不行,因为样品量较少,但是你可以用超滤管试试
9楼2012-09-14 08:45:25
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aixia5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
xylem: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-15 00:40:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by xylem at 2012-09-13 12:26:10
30kd.但这样会不会对蛋白损失过大啊,样品本来就不多。现在保存在裂解液中。
...

那你用3KD的或者10KD的,你的目标蛋白不损失就可以了。浓缩效果挺好的。一般用三种,一个是0.5ml浓缩到20ul,4ml浓缩到60ul,15ml浓缩到250ul.
10楼2012-09-14 09:03:06
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_然然

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xylem at 2012-09-13 19:09:31
蛋白存放在裂解夜中,这样能做吗?...

我们之前 是电洗脱方法纯化蛋白 蛋白融在溶液中  外加peg干燥 不知你的情况 可以试一下
11楼2012-09-14 14:29:26
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sswisdomss

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是蛋白浓度低,量还大吧?
最好的方法就是超滤浓缩
12楼2012-09-14 15:31:13
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

16楼2013-04-26 20:17:51
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普通回帖

xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
硫酸铵沉淀、冻干或者是密理博的超滤管浓缩
2楼2012-09-13 09:36:35
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aixia5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
买一个millipore的超滤管就可以了,一个100左右,离心就可以了。你要的蛋白是多少KD的?
3楼2012-09-13 10:20:43
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_然然

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
放在透析袋里 peg6000透析
4楼2012-09-13 10:27:56
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xylem

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aixia5 at 2012-09-13 10:20:43
买一个millipore的超滤管就可以了,一个100左右,离心就可以了。你要的蛋白是多少KD的?

30kd.但这样会不会对蛋白损失过大啊,样品本来就不多。现在保存在裂解液中。

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5楼2012-09-13 12:26:10
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xylem

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xl0071334 at 2012-09-13 09:36:35
硫酸铵沉淀、冻干或者是密理博的超滤管浓缩

会不会导致样品损失过多呀

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6楼2012-09-13 12:27:33
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xylem

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by _然然 at 2012-09-13 10:27:56
放在透析袋里 peg6000透析

蛋白存放在裂解夜中,这样能做吗?
7楼2012-09-13 19:09:31
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