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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于蛋白浓度测定
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cindererra

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于蛋白浓度测定 已有4人参与

请教各位，我用考马斯亮蓝法测蛋白浓度，为什么测出来的会比理论值低100倍呢？而且目的蛋白稀释不同的倍数，测出来的值也相差非常大，通常是几十倍的差别，不管是用试剂盒还是自己配制的考马斯亮蓝溶液都一样。不知道是不是蛋白的溶剂的问题呢，我的蛋白一个是从大孔吸附柱洗脱下来的，含有异丙醇和乙酸；另一个是阴离子交换洗脱液，含有哌嗪和NaCl。有哪位遇到过这种问题，或是研究过，能不能帮我分析一下？谢谢
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1楼 2010-10-10 16:37:27
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
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amisking(金币+1):good！ 2010-10-10 17:26:13
有些溶剂会影响到蛋白浓度测定的，pH亦有一定影响。所以最好能将这些有机试剂通过透析去除掉然后再测。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-10-10 16:44:44
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幽蓝王子

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3): 2010-10-10 17:26:17
你把样品煮沸的时候打开盖子煮，有机溶剂可以挥发出去，盐离子可以透析，这个只能大概看，而且有经验的人才能看出来多少浓度。你最好用其他方法，你蛋白纯不？纯的话可以用lowry法测，精度很高，试剂也很简单。只有五种。
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我是你转身就忘记的路人甲凭什么让我陪你蹉跎到天涯
3楼2010-10-10 17:03:57
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
醇类肯定有影响啊，建议先用脱盐柱脱盐处理啊。
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4楼2010-10-10 20:43:30
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这种问题请搜索旧帖，已解决，不用浪费时间等回帖。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2010-10-10 20:46:10
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
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silicare(金币-1):非水帖，严禁纯表 2010-10-11 11:46:57
6楼2010-10-11 11:42:17
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