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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白质含量测定问题
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wissl52100

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白质含量测定问题

各位生物界的达人，请教个问题，我是材料学专业的，但是我的课题涉及到样品蛋白质含量的测定，我也查了一些资料，有很多方法，比如紫外分光光度法，开始要绘制标准曲线，我想问的是，大多数用的是牛血清蛋白做标准样品，而我的样品中蛋白质类型不一样，能否参照标准曲线。还有既然是标准曲线我是不是不用自己绘制，直接参照别人的，因为标准样品都是一样的啊，但是我在网上查的很多标准曲线相差很大，都不一样啊，请各位指导下？可能问的问题大家觉得可笑，但还是想听下大家的意见！谢谢~~~~
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1楼2011-01-17 20:12:14
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wissl52100

铜虫 (小有名气)
还有个问题，就是做紫外的时候，好像样品的蛋白质浓度有范围规定，在0.1~1mg/ml之间，但是我的样品我也不知道蛋白质的浓度在什么范围内，那该怎么办啊？
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2楼2011-01-17 20:16:38
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-17 22:53:31
wissl52100(金币+2): 2011-01-18 10:41:48
标准曲线还是要自己做，不同人不同仪器不同操作方法得出来的结果都不一样。
选择标准蛋白也要因试验而异。
可以多做几个梯度。
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3楼2011-01-17 20:25:13
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henkally

禁虫 (著名写手)
wissl52100(金币+2): 谢谢~ 2011-01-18 10:41:34
本帖内容被屏蔽
7楼2011-01-18 10:27:12
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xhjggl

木虫 (正式写手)
wissl52100(金币+2): 谢谢 2011-01-18 14:03:19
买个试剂盒就可以了，上海生工有
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白质定量检测试剂盒       
产品说明：BCA法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA特异地与Cu1结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可以根据吸收值测定蛋白质浓度。该测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质去垢剂等影响小。
产品特点：
1.准确灵敏，线性范围广，BCA试剂的蛋白质测定范围是25－500μg/ml;
2.快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便;
3.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响;
4.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝,可以酶标板法或分光光度计法测定蛋白质浓度。
编号        包装        价格        产地
SK3021        500 Assays        450        生工
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8楼2011-01-18 12:36:33
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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23楼2012-10-30 17:03:49
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wissl52100

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wuw579 at 2011-01-17 20:25:13:
标准曲线还是要自己做，不同人不同仪器不同操作方法得出来的结果都不一样。
选择标准蛋白也要因试验而异。
可以多做几个梯度。

什么叫多做几个梯度？我看一些资料中写到蛋白质含量可以直接算出：c=1.45A280-0.74A260     这是不是说可以不用做标准曲线了，我的课题在蛋白质含量测量不用特别精确，直接按上式算可取吗？
还我我2楼提到的这个问题，样品蛋白质含量范围无法确定，该怎么办？

还请赐教！谢谢~
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4楼2011-01-17 21:48:37
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wissl52100

铜虫 (小有名气)
自己顶:dnd:
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5楼2011-01-18 09:19:08
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
wissl52100(金币+2): 2011-01-18 10:41:42
标准曲线得自己做，我们一般就用牛血清蛋白的
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6楼2011-01-18 10:12:24
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2011-01-18 12:36:33:
买个试剂盒就可以了，上海生工有
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白质定量检测试剂盒       
产品说明：BCA法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA特异地与Cu1结 ...

是你吗？生工男
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9楼2011-01-18 15:21:57
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
对了 用试剂盒也可以   而且你也说了你的蛋白与BSA性质不同  怎么可以用别人的标准曲线呢   梯度就按你查到的做就可以了
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10楼2011-01-18 19:13:00
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xinmeihappy

金虫 (初入文坛)
当蛋白样品的吸光收比值A280／A260约为1.8，可用下面的公试进行计算：
蛋白质浓度（mg/ml）＝（1.45A280 －0.74A260）×K
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11楼2011-01-19 10:28:53
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juno_j

铜虫 (初入文坛)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-10 18:46:15
自己做标线不麻烦的，选择和你样品中物质相同的蛋白质做标线就好。如果对准确度要求不是很高，直接用牛血清蛋白的标线也行的，但是最好自己做。

样品的浓度确定，你可以自己试下，配不同浓度的样品溶液，和标线一起做，只要出来的分光光度计的读数在标线读数的范围内，就说明是合适的。标线上限外的就稀释，标线下限以下的就提高初始浓度
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12楼2011-04-08 15:48:32
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gppwfh

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wissl52100 at 2011-01-17 20:12:14:
各位生物界的达人，请教个问题，我是材料学专业的，但是我的课题涉及到样品蛋白质含量的测定，我也查了一些资料，有很多方法，比如紫外分光光度法，开始要绘制标准曲线，我想问的是，大多数用的是牛血清蛋白做标准 ...

多做几个梯度
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13楼2011-04-08 16:30:32
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)
★
西瓜(金币+1): 赞成！ 2011-04-10 18:46:40
标准曲线还是要自己做，不同人不同仪器不同操作方法得出来的结果都不一样。买个BCA蛋白定量试剂盒，按照说明书操作就可以了。标准曲线有线性范围的，如果测出来的样品浓度不在这个区间，则必须进行稀释后再测。
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14楼2011-04-10 11:48:59
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0640409

银虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励新虫交流 2011-04-14 22:32:00
标曲每次做都要自己做，不能用别人的
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15楼2011-04-14 21:29:33
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guohq0316

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by xhjggl at 2011-01-18 12:36:33:
买个试剂盒就可以了，上海生工有
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白质定量检测试剂盒       
产品说明：BCA法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA特异地与Cu1结 ...

你好：我需要测定豆饼粉中蛋白质的含量，请教我该如何去做，因为豆饼粉不宜溶解，在pH=7时的磷酸缓冲盐中部分溶解但也不保证蛋白质完全溶解，急...凯氏定氮法不准确。不知道该如何办？
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16楼2011-08-04 15:58:32
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carot

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
曲线肯定要自己做 而且每一次测量都要做的 建议用试剂盒比较好
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17楼2011-12-06 09:40:00
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落满夏天

银虫 (正式写手)
★
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小丹木木(金币+3): 鼓励交流 2012-02-13 17:57:15
我们用的是lowry法,你的线性梯度可以这么设置,牛血清蛋白稀释到0.1mg每毫升,精确稀释,然后梯度是,0ul,200ul,400ul,600ul,800ul,1000ul,统一用水补到1ml.样品的话稀释到浓度50ug每毫升.
但是这个方法影响因素多,得研究下你的缓冲体系有没有影响物质,一般有氧化还原的东西都不行,BCA原理也是氧化还原,考染的话我很少做,但是个人觉得这方法误差可能大些.另外关键的一点是你所测的蛋白结构不能与牛血清蛋白差太多,差太多就没有意义了.紫外扫描的话是苯环状氨基酸吸收,纯度好的话可以用,建议你两种方法对比研究.
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18楼2012-02-13 17:24:02
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落满夏天

银虫 (正式写手)
对了,忘记说了,线性自己做,你的浓度不同线性结果页不同,可以拿excl表做,紫外风光光度计的话也可以.
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19楼2012-02-13 17:25:32
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1560425楼: Originally posted by guohq0316 at 2011-08-04 15:58:32:
你好：我需要测定豆饼粉中蛋白质的含量，请教我该如何去做，因为豆饼粉不宜溶解，在pH=7时的磷酸缓冲盐中部分溶解但也不保证蛋白质完全溶解，急...凯氏定氮法不准确。不知道该如何办？

根据我的知识，如果样品不易溶解，目前的蛋白浓度测定都不行的，因为现在的考马斯、BCA方法测定都是比色法的，蛋白不溶解就没办法比色了呀。
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20楼2012-05-14 11:12:49
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wyzmkm

铁虫 (初入文坛)
★
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请问，用紫外分光光度法测球状蛋白的含量时，如何选择标准蛋白？
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21楼2012-10-19 21:07:49
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匿名

用户注销 (正式写手)
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22楼2012-10-30 17:00:30
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匿名

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24楼2013-10-08 14:10:43
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露露爱鱼鱼

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
18楼: Originally posted by 落满夏天 at 2012-02-13 17:24:02
我们用的是lowry法,你的线性梯度可以这么设置,牛血清蛋白稀释到0.1mg每毫升,精确稀释,然后梯度是,0ul,200ul,400ul,600ul,800ul,1000ul,统一用水补到1ml.样品的话稀释到浓度50ug每毫升.
但是这个方法影响因素多,得研 ...

你好，我也想用LOWRY法测蛋白质，请问下你们的具体操作方法有么，我看了好多方法，都特别麻烦，可以用下你们的方法么，谢谢
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25楼2017-02-11 13:12:34
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