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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lsx08

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】蛋白质含量测定

我想用凝胶柱分离不同分子量的蛋白质,结果很不理想,分离不开,不知有没有做过这方面的高手可以指点一下,谢谢!
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★ ★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-05 19:09:52
翱宇(金币+1): 鼓励交流! 2011-03-05 22:11:47
lsx08(金币+1): 2011-03-07 08:39:39
lsx08(金币+1): 2011-03-07 14:36:51
凝胶柱的选择很重要,不同型号分离范围不一样的。如果两个蛋白分子量相差不是很的话,还是选择其他的方法分离,效果会好点。
2楼2011-03-05 18:18:02
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cjl2fl

金虫 (正式写手)


是不是吸附有问题,或者纯化的方法要换下?
试试CMC株呢?
3楼2011-03-05 21:12:46
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vmuch520

至尊木虫 (文坛精英)


我完全不懂这个...
什么电泳法。。。行不?
4楼2011-03-05 21:36:57
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)


lsx08(金币+1): 2011-03-07 08:40:04
不同填料的凝胶柱分离范围不一样 效果差别很大。你可以换其他柱子试一试。应该会有比较理想的效果。
5楼2011-03-05 23:52:29
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lisa68320

新虫 (初入文坛)


★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-06 15:09:07
lsx08(金币+1): 2011-03-07 08:38:47
安马西亚生产的分子筛有多种规格,网上也可以查到,你可以准确的选取可以区分不同分子量的柱子,比如说我们实验室常常用于分离30-70KD的蛋白,那么我们一般用superdex200就可以有很好的效果,但是如果想分离几KD和十几KD的蛋白,我们就会换成superdex75,总之你要确定自己的蛋白分子量再选择合适的柱材
6楼2011-03-06 12:46:31
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lsx08

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by lisa68320 at 2011-03-06 12:46:31:
安马西亚生产的分子筛有多种规格,网上也可以查到,你可以准确的选取可以区分不同分子量的柱子,比如说我们实验室常常用于分离30-70KD的蛋白,那么我们一般用superdex200就可以有很好的效果,但是如果想分离几KD和 ...

我要分离的是10KD~40KD的蛋白质,但是样品中的蛋白质含量很低,根本不出峰,加大样品浓度也不行,这该怎么办呢?还有就是你们实验室用的色谱条件(流动相、流速等)能否赐教一下?十分感谢!
7楼2011-03-07 08:45:13
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lisa68320

新虫 (初入文坛)


★ ★
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-03-07 11:13:33
lsx08(金币+2): 2011-03-07 14:19:29
引用回帖:
Originally posted by lsx08 at 2011-03-07 08:45:13:
我要分离的是10KD~40KD的蛋白质,但是样品中的蛋白质含量很低,根本不出峰,加大样品浓度也不行,这该怎么办呢?还有就是你们实验室用的色谱条件(流动相、流速等)能否赐教一下?十分感谢!

浓度低不出峰只能说明你的样本太稀,可能需要你将样本加倍浓缩才行。我们一般都会用milipore公司的浓缩装置浓缩样本然后上样。条件因蛋白而异,也根据你后续实验而异,只要不会使蛋白发生变形就行。祝你好运
8楼2011-03-07 09:53:37
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lsx08

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-03-05 18:18:02:
凝胶柱的选择很重要,不同型号分离范围不一样的。如果两个蛋白分子量相差不是很的话,还是选择其他的方法分离,效果会好点。

我想在保持蛋白质活性的情况下将其与杂蛋白分离,杂蛋白的含量很低且分子量相差的不是很大,不知你有没有什么方法可以推荐?谢谢指教!
9楼2011-03-07 14:36:26
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lsx08

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by cjl2fl at 2011-03-05 21:12:46:
是不是吸附有问题,或者纯化的方法要换下?
试试CMC株呢?

我感觉是样品中杂蛋白含量太低,检测不出HPLC峰
10楼2011-03-07 14:45:29
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lsx08

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by vmuch520 at 2011-03-05 21:36:57:
我完全不懂这个...
什么电泳法。。。行不?

电泳方法做了,现在想用HPLC做
11楼2011-03-07 14:46:06
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lsx08 at 2011-03-07 14:36:26:
我想在保持蛋白质活性的情况下将其与杂蛋白分离,杂蛋白的含量很低且分子量相差的不是很大,不知你有没有什么方法可以推荐?谢谢指教!

离子交换和疏水层析等都可以分开的。
13楼2011-03-07 16:04:27
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cjl2fl

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以这样做的,如果杂蛋白太多,可以过下柱子,初步纯化下蛋白,再超滤浓缩,这样应该能测到的吧?
14楼2011-03-07 16:56:15
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lsx08

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by lsx08 at 2011-03-07 14:45:29:
我感觉是样品中杂蛋白含量太低,检测不出HPLC峰

我配制的溶液是10mg/ml,目的蛋白的峰已经出现了平头峰,杂蛋白还是没有出峰,该怎么办呢?
15楼2011-03-08 08:52:01
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lsx08

新虫 (初入文坛)


自己顶一下,希望高手们多多发表意见
16楼2011-03-14 11:15:44
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简单回复
小小198212楼
2011-03-07 15:00   回复  
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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