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可溶性蛋白含量测定
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殷灿灿
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[交流]
可溶性蛋白含量测定
为什么我在用考马斯亮蓝比色法测可溶性蛋白含量做标准曲线时,按照标准方法加的试剂,颜色反应却不明显,试剂没有问题,请各位赐教了
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1楼
2012-03-22 14:51:43
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殷灿灿
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3楼
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Originally posted by
liuzhaoxia
at 2012-03-22 15:38:49:
你的标准溶液浓度是按方法中一样的吗?
采用考马斯亮蓝G-250染色法:
标准曲线的制作:取6支具塞试管,编号,并加入100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,用蒸馏水补至1.0mL,混匀后 ...
方法完全是你说的那样,但就是吸光度值特低,而且不同浓度处理吸光度没什么变化,真是搞不懂
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2012-03-22 15:44:23
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ningda47
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4楼
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Originally posted by
殷灿灿
at 2012-03-22 15:44:23:
方法完全是你说的那样,但就是吸光度值特低,而且不同浓度处理吸光度没什么变化,真是搞不懂
这个牛血清白蛋白用的是那种的啊,牛血清白蛋白(全组分)和牛血清白蛋白V,哪一种啊
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8楼
2012-04-24 09:42:06
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有可能是你测的物质中蛋白含量太低了
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2012-03-22 14:58:20
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liuzhaoxia
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树树8013: 金币+2, 谢谢细心回答。
2012-04-25 18:43:30
你的标准溶液浓度是按方法中一样的吗?
采用考马斯亮蓝G-250染色法:
标准曲线的制作:取6支具塞试管,编号,并加入100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,用蒸馏水补至1.0mL,混匀后,向各试管中加入5.0mL考马斯亮蓝G-250溶液,立即充分混合,静置2min后,以0管为空白对照,在波长595nm处测定吸光度值。以蛋白质质量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,求得线性回归方程。
100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液的配制:称取25mg牛血清白蛋白,加入蒸馏水溶解并定容至100mL。吸取上述溶液40mL,用蒸馏水稀释至100mL即可。
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殷灿灿
3楼
2012-03-22 15:38:49
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wangpei1991
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应该是蛋白浓度问题 还有就是分光光度计测的值应最好在0.2-0.8之间
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5楼
2012-03-22 16:22:29
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kading
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只要是测出来结果对就行了啊,前面颜色什么的不重要啊,和很多因素有关的啊
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6楼
2012-03-27 08:15:43
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qiaqia832
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2012-04-25 18:44:06
标准蛋白浓度是不是有问题,还有考马斯亮蓝溶液配制后最好放置一周,这样测得的标准曲线会好点儿
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9楼
2012-04-24 09:58:10
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冯淼淼2011
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您好,这个问题您解决了吗,我最近也遇到类似的问题了!
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10楼
2014-04-22 09:48:43
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没入尘埃5
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殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
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3楼
:
Originally posted by
liuzhaoxia
at 2012-03-22 15:38:49
你的标准溶液浓度是按方法中一样的吗?
采用考马斯亮蓝G-250染色法:
标准曲线的制作:取6支具塞试管,编号,并加入100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,用蒸馏水补至1.0mL,混匀后, ...
你好,我看到你测定可溶性蛋白的方法,有几个问题想要想你咨询一下:
1 配制考马斯亮蓝母液的时候,有的说要用无水乙醇,有的说要95%的乙醇,这两种乙醇配出来的考马斯亮蓝效果有区别吗?乙醇和磷酸的作用都是什么啊?
2 我看到有的资料里做标准曲线的溶液不是用蒸馏水补足1ml,是用Nacl补足的,这有什么区别吗?Nacl的作用是什么啊?
谢谢啦!
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11楼
2014-06-27 08:20:53
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没入尘埃5
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9楼
:
Originally posted by
qiaqia832
at 2012-04-24 09:58:10
标准蛋白浓度是不是有问题,还有考马斯亮蓝溶液配制后最好放置一周,这样测得的标准曲线会好点儿
你好,请问考马斯亮蓝溶液放置一周是指的考马斯亮蓝母液放置一周吗?考马斯亮蓝溶液是用无水乙醇配置还是95%乙醇?有什么区别?
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12楼
2014-06-27 08:22:07
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cz0919
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殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
我的标曲竟然是负值,谁知道什么情况?样品0.2多正常
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13楼
2015-11-26 21:44:24
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小小558
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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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8楼
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Originally posted by
ningda47
at 2012-04-24 09:42:06
这个牛血清白蛋白用的是那种的啊,牛血清白蛋白(全组分)和牛血清白蛋白V,哪一种啊...
不同的血清蛋白会影响结果吗
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14楼
2017-11-23 16:24:48
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yqfjp023
7楼
2012-03-27 08:19
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殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
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