应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母表达可溶性蛋白问题
131/1返回列表
查看: 3537  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sunyi_lab

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酵母表达可溶性蛋白问题

第一次发帖，如有错误，大家多多批评哈

   本人用酿酒酵母想表达一个转到PYES2里的目的基因，想表达出可溶蛋白，用聚丙烯酰胺凝胶电泳来看的结果，做了好多次都似有似无，求解决方法？还是因为酵母表达出来的蛋白量很小不易观察呢？
   
    刚开始做实验，好多不懂，希望大虾赐教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-03-26 18:47:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
sunyi_lab(金币+1): 呵呵，谢谢，先去照一下 2011-03-27 08:21:05
楼主啊，“似有似无”的情况，能不能贴个电泳图片来看看？这样大家更容易帮你哦
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-26 22:35:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyi_lab

银虫 (小有名气)

附上电泳图

实验是以未诱导的菌破碎蛋白作为空白对照，本人需要的蛋白应该在红色marker和下面的蓝色条带中间出现，可不知为什么感觉空白对照比诱导的还多了一条带，好奇怪。请各位大侠多多指教
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-27 18:10:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★
sunyi_lab(金币+5): 呵呵，谢谢啦 2011-03-30 07:26:10
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-05 17:35:22
酿酒酵母这个表达系统用的是组成型启动子，表达量一般情况下都不会很高，建议有tag的话，纯化或者做个western看看。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-03-28 22:53:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangzhenheng

铜虫 (初入文坛)

请大侠们继续赐教

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-03-28 22:53:27:
酿酒酵母这个表达系统用的是组成型启动子，表达量一般情况下都不会很高，建议有tag的话，纯化或者做个western看看。

有his tag，用试剂盒纯化后无明显条带，是量少的看不出来还是没有表达呢？因为要做酶活性，而酶活要用的底物比较贵，希望确证有蛋白后再做。
请问还有其它确证有否表达蛋白的方法吗？
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-30 07:33:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
sunyi_lab(金币+2): 谢谢 2011-04-14 08:52:08
引用回帖:
Originally posted by wangzhenheng at 2011-03-30 07:33:21:
有his tag，用试剂盒纯化后无明显条带，是量少的看不出来还是没有表达呢？因为要做酶活性，而酶活要用的底物比较贵，希望确证有蛋白后再做。
请问还有其它确证有否表达蛋白的方法吗？

可以先做个western吧，用his-taq的抗体，天根有的卖，效果还过得去。
赞一下 回复此楼
7楼2011-03-30 17:22:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunzhongfan

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
sunyi_lab(金币+2): 谢谢回帖交流 2011-05-05 10:16:12
可以做RT-PCR先看看目的基因是否表达
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-05-03 21:21:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyi_lab

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yunzhongfan at 2011-05-03 21:21:46:
可以做RT-PCR先看看目的基因是否表达

小妹刚开始做，不太懂，我的目的基因在质粒载体上，为什么要做反转录呢？大侠啥意思？具体怎样做？谢谢交流
赞一下 回复此楼
9楼2011-05-05 10:18:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yylc1840

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
毕赤酵母 是目的基因要插入到基因组里的，不知道酿酒酵母是不是
赞一下 回复此楼
10楼2012-06-11 21:31:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stlion223

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1274885楼: Originally posted by sunyi_lab at 2011-05-04 20:18:50
小妹刚开始做，不太懂，我的目的基因在质粒载体上，为什么要做反转录呢？大侠啥意思？具体怎样做？谢谢交流...

他是说让你看看目标基因有没有转录 我觉得一般情况下酵母的启动子比较好用 转录都没有问题
赞一下 回复此楼
11楼2012-06-12 11:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijuan211715

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by susizheng at 2011-03-28 22:53:27
酿酒酵母这个表达系统用的是组成型启动子，表达量一般情况下都不会很高，建议有tag的话，纯化或者做个western看看。

请问你用的是哪个载体呢？
赞一下 回复此楼
12楼2013-06-19 16:15:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxw_2010

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
凝胶电泳分辨率较低，用银染试试
赞一下 回复此楼
13楼2017-07-21 08:10:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
k-li2楼
2011-03-26 20:05   回复  
sunyi_lab(金币+2): 谢谢支持，呵呵，请大家多多帮忙 2011-03-26 21:21:31
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunyi_lab 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭