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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大家见到过毕赤酵母表达出的外源蛋白分子量比实际分子量小吗，而且还有活性？
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jia1012428

铜虫 (小有名气)

[交流] 大家见到过毕赤酵母表达出的外源蛋白分子量比实际分子量小吗，而且还有活性？

大家见到过毕赤酵母表达出的外源蛋白分子量比实际分子量小吗，而且还有活性？
我用的质粒9k，宿主gs115，基因用信号肽软件分析去掉了信号肽，结果表达的蛋白短了一截，已经做了纯化和N端测序，发现这段蛋白不包括克隆氨基酸的前70多个。注：氨基酸序列没有Kex2切割位点。
求遇到同样情况的兄弟姐妹。。。。
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1楼 2011-08-22 22:53:32
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86269480

金虫 (初入文坛)
★
jia1012428(金币+1):谢谢参与
是部分降解发生吗？
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2楼2011-08-23 08:45:00
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 86269480 at 2011-08-23 08:45:00:
是部分降解发生吗？

估计是由细胞内分泌到细胞外的过程中，其它蛋白酶错误切割或酶的特殊构象所致，但没想好怎么能证明这两个观点。
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3楼2011-08-23 09:02:54
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86269480

金虫 (初入文坛)
楼主好，请加523571991交流下吧
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5楼2011-08-23 09:41:10
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86269480

金虫 (初入文坛)
楼主好啊，如何联系到你
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7楼2011-08-25 09:43:31
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gene001

金虫 (正式写手)
★
jia1012428(金币+1):谢谢参与
我觉得真有这样的现象多好呀！可以表达它有活性那部分即可，哈哈！有可能在转运过程中被酵母细胞内酶降解了！
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8楼2011-08-30 21:07:05
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gene001 at 2011-08-30 21:07:05:
我觉得真有这样的现象多好呀！可以表达它有活性那部分即可，哈哈！有可能在转运过程中被酵母细胞内酶降解了！

你说设计实验证明这个有没有意义？
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9楼2011-08-31 22:17:06
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辉辉集团

银虫 (正式写手)
★
jia1012428(金币+1):谢谢参与
有活性是有这个可能的啊 不知道活性怎么样？
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10楼2011-09-01 10:05:46
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 辉辉集团 at 2011-09-01 10:05:46:
有活性是有这个可能的啊 不知道活性怎么样？

提高了10几倍 在摇瓶上！
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11楼2011-09-01 12:45:36
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86269480

金虫 (初入文坛)
分子量偏小的问题解决了吗？同求答案
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12楼2011-10-28 10:03:21
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jingxiu999

新虫 (初入文坛)
★
jia1012428(金币+1):谢谢参与
我的残酷的9k啊还没有表达出来。
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13楼2012-02-20 15:37:14
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yangyufeng88

木虫 (正式写手)
★
jia1012428(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
892483楼: Originally posted by jia1012428 at 2011-08-31 22:17:06:
你说设计实验证明这个有没有意义？

看你的目的是什么了,如果想研究这个酶的结构功能相关关系的，还是有意义的。
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14楼2012-03-29 10:50:24
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Allen206

银虫 (小有名气)
★
jia1012428(金币+1): 谢谢参与
N端测序的结果怎么样？测了多少个？
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15楼2014-01-08 17:37:09
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)
★
jia1012428(金币+1): 谢谢参与
测个序看看缺哪部分
再根据本身的结构域分析一下
意义肯定是有的
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16楼2014-01-09 09:06:30
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z大伟

木虫 (正式写手)
★
jia1012428(金币+1): 谢谢参与
我做过，N末端不均一性。有的蛋白前体N被切除了，但是有活性。你的表达产物中有没被切除末端的蛋白没？
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17楼2014-10-16 21:04:00
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jjwhl

银虫 (正式写手)
★
jia1012428(金币+1): 谢谢参与
楼主，我的酶蛋白经毕赤酵母表达，SDS-PAGE电泳显示比用软件ExPasy理论分析的要小4KDa，正常么？楼上的这个问题最后是怎么解决的呢？
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18楼2015-03-16 20:05:01
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zhuzhuwinner

禁虫 (初入文坛)
★
jia1012428(金币+1): 谢谢参与
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19楼2021-07-16 15:26:50
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东木以东

禁虫
★
jia1012428(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
20楼2021-07-23 17:35:16
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haiou164楼
2011-08-23 09:39   回复  
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luck87569356楼
2011-08-23 10:12   回复  
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bjdxyxy21楼
2021-07-23 17:52   回复  
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