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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达小分子蛋白有什么技巧
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sweet561

银虫 (小有名气)

[交流] 表达小分子蛋白有什么技巧 已有11人参与

目前，正在用真核表达载体pPIC9K表达胰岛素基因，由于目的基因较小，蛋白分子量只有6.3KD，用SDS-PAGE电泳跑胶都比较弥散，看不出目的蛋白是否表达，希望各位能给予帮助，有什么好的方法，谢谢！
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1楼 2013-10-29 11:05:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wanghx_2012

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 22:51:40
蛋白分子量太小，低于14KD的蛋白在普通SDS-PAGE上就很难看跑好了，可以使用Tricine-SDS-PAGE,或则连接报道基因（GFP），再进行检测就方便了。
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9楼2013-10-30 15:15:59
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shyh1983

金虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 00:04:53
对于10kd以下的蛋白的电泳检测，要想得到好的结果，最好使用Tricine-SDS-PAGE进行检测。
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3楼2013-10-29 16:35:47
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zhangyt7638

木虫 (著名写手)
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 22:51:47
Tricine-SDS-PAGE或20%的普通SDS-PAGE，电压要低30V   80V。
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8楼2013-10-30 14:19:59
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yinl03

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
融合到可溶性蛋白比如gst,mbp蛋白标签表达，中间加个intein，表达后诱导从intein切掉标签蛋白，就可以得到你的小蛋白

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2013-11-01 12:41:17
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普通回帖

wuyao0513

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 00:04:58
可以调整胶的配制啊，选择更小的maker
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2楼2013-10-29 11:46:41
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sweet561

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shyh1983 at 2013-10-29 16:35:47
对于10kd以下的蛋白的电泳检测，要想得到好的结果，最好使用Tricine-SDS-PAGE进行检测。

我也看到有文章用Tricine-SDS-PAGE进行检测，请问你用过此方法吗，能把具体的缓冲液及制胶方法说一下吗，谢谢！
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4楼2013-10-30 08:48:16
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shyh1983

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by sweet561 at 2013-10-30 08:48:16
我也看到有文章用Tricine-SDS-PAGE进行检测，请问你用过此方法吗，能把具体的缓冲液及制胶方法说一下吗，谢谢！...

你给个邮箱账号，我发给你。
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5楼2013-10-30 10:58:35
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sweet561

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by shyh1983 at 2013-10-30 10:58:35
你给个邮箱账号，我发给你。...

邮箱：sweet561@163.com，非常感谢！
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6楼2013-10-30 11:37:26
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wangpeng227

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看你干什么用了，要是带上个大一点的标签，比如GFP啥的，分子量大一点就好操作了。
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7楼2013-10-30 13:29:17
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