应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达分子量偏大
261/3返回列表123下一页
查看: 5673  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达分子量偏大 已有1人参与

最近在做重组蛋白表达，表达之后也有目的条带，但是就是分子量比理论值要偏大。我的质粒是经过测序的，没有碱基的缺失和突变。另外，我做的是SDS-PAGE.偏大5-50都不等，各位大师帮帮忙，解决下...  着急啊！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-12 20:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
SDS-PAGE确定的分子量不是很准确的，有些蛋白的疏水性强，等电点高，在胶上跑得慢也不足为奇。只要确定表达的蛋白正确就可以了。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-13 00:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些偏大很常见的，可以通过表达测试时设置阴性对照来初步确认。
进一步确认可以通过活性检测。
赞一下 回复此楼
小兵一个
3楼2013-03-13 13:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-13 00:21:10
SDS-PAGE确定的分子量不是很准确的，有些蛋白的疏水性强，等电点高，在胶上跑得慢也不足为奇。只要确定表达的蛋白正确就可以了。

哦 谢谢
回复此楼
4楼2013-03-13 16:36:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by linxt2005 at 2013-03-13 13:13:03
有些偏大很常见的，可以通过表达测试时设置阴性对照来初步确认。
进一步确认可以通过活性检测。

对照是有的 就是表达的目的蛋白偏大
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-13 16:37:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Phyrce

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-10 13:13:55
楼主你倒是说说目标蛋白的大小啊。 目标蛋白5KD偏大5KD ，跟目标蛋白50KD偏大5KD，那不是一个概念啊。
SDS-PAGE是不太准确，不过50KD的话，就太夸张了吧- -
而且SDS-PAGE根据的就是蛋白分子量大小，蛋白被负电荷包裹主要受电场力作用迁移，跟等电点疏水什么的关系不大啊。
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-13 17:29:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by Phyrce at 2013-03-13 17:29:13
楼主你倒是说说目标蛋白的大小啊。 目标蛋白5KD偏大5KD ，跟目标蛋白50KD偏大5KD，那不是一个概念啊。
SDS-PAGE是不太准确，不过50KD的话，就太夸张了吧- -
而且SDS-PAGE根据的就是蛋白分子量大小，蛋白被负电荷包 ...

SDS-PAGE虽然把变性变性并且由于蛋白表面结合了SDS而带负电荷，但是实际上疏水性强的蛋白变性不完全，所以不会是标准的球形。等电点高的蛋白即使结合了SDS，所带的电性也比较少，所以它们在胶上移动比较慢。
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-14 05:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackhua17

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2013-03-14 10:32:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Phyrce at 2013-03-13 17:29:13
楼主你倒是说说目标蛋白的大小啊。 目标蛋白5KD偏大5KD ，跟目标蛋白50KD偏大5KD，那不是一个概念啊。
SDS-PAGE是不太准确，不过50KD的话，就太夸张了吧- -
而且SDS-PAGE根据的就是蛋白分子量大小，蛋白被负电荷包 ...

是这样的，我的理论值是70KD,但是在脚上的为止已经有120KD了，还有一个样品的理论值是37KD，胶上就是四十多了，还有请教一下蛋白序列的亲疏水性怎么判别呢
赞一下 回复此楼
9楼2013-03-14 15:37:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jackhua17 at 2013-03-14 10:32:30
为什么你们表达蛋白都不用MS确认一下精确的分子量呢？

MS 是什么？
回复此楼
10楼2013-03-14 15:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 田甜思 的主题更新
261/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭