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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 考马斯亮蓝测定蛋白的结果受蛋白的分子量大小的影响吗？
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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧

[交流] 考马斯亮蓝测定蛋白的结果受蛋白的分子量大小的影响吗？ 已有7人参与

研究表明，考马斯亮蓝测蛋白的主要机理是，考马斯亮蓝能够与蛋白中的碱性氨基酸结合，那么我想问测定结果是否受蛋白的分量的影响？比如说蛋白经过一定程度的水解，原始蛋白与不同水解程度的蛋白、完全水解后的氨基酸溶液是否一致？分子量超大的蛋白，是否会因为其复杂的结构，考马斯亮蓝无法与藏在蛋白内部的碱性氨基酸结合而结果偏低？如果测定结果受分子量的影响的话，是不是说所测蛋白的分子量必须某个该范围内，比如说在牛血清蛋白分子量（所采用的的标准物质，68kDa）上下多少范围内，才能够采用该方法定量测定？如果不是在这个特定的范围内，是不是所得蛋白的含量只能是相对的，只能在同一种测定方法，同一种测定目标之间进行比较，比如说啤酒，采用BCA或者Lowry与此方法所得结果之间没有可比性，而同样采用考马斯亮蓝法测定的啤酒和麦汁中蛋白的结果间也不具有可比性？
实际上，我只是想测多肽含量，参照大豆肽粉的行业标准，但是不想用凯氏定氮，想用一种更便捷的测定多肽和游离氨基酸总量的方法，然后再扣除游离氨基酸的含量。如果说考马斯亮蓝法只是无法测定游离氨基酸的量，那么我就可以直接用这种方法测定了，如果说某个分子量一下的多肽都测不出来，比如说2KDa，我就不能用这种方法。
有一篇文献里测多肽也是用的这种方法，可是想想又有诸多不妥。
想了这么多，考马斯亮蓝这种方法，好像不是一种十分精确的方法，需要探讨的东西很多？
问问各位大中小牛们，你们有没有过这样的想法或做过类似的试验？
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研究僧
1楼 2012-02-22 17:16:44
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14790087509
2楼2012-02-22 18:48:32
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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧
引用回帖:
楼: Originally posted by 14790087509 at 2012-02-22 18:48:32:

LZ很纠结的。。。
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研究僧
3楼2012-02-22 19:57:59
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黑色月光

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
测小肽用福林酚法好了，这个还是可以的……另外，考马斯亮蓝法测蛋白时，分子量小的多肽好像测不出来，这个是我师姐做类似实验的经验……凯氏定氮误差大、时间长，不好用的，不过你可以用它测总蛋白
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4楼2012-02-23 12:34:01
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roydxy

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
的确很纠结！
建议多种方法都尝试一下，找出最适合自己实验的，单纯理论讨论…没结果
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5楼2012-02-23 23:00:06
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wujia115

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
应该是受到分子量影响的，例如测定蛋白和小肽时的溶液颜色就不一样。
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6楼2012-02-24 10:02:20
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
当然受蛋白的分子量大小，较小的多肽效果差
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7楼2012-02-29 22:41:22
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
考马斯测浓度是根据标准蛋白的颜色来的吧楼主，既然这样肯定是与分子量有很大关系的，我也在纠结蛋白浓度的问题，但是现在最准确的方法也是用标准蛋白做基准测浓度，没办法固定到说能测到你的多肽或蛋白的准确浓度，我师姐说这个方法只是用来做浓度调整的，无法做准确定量。我只知道这些。
噢对了，啤酒蛋白含量各种方法不一样原因是因为啤酒中含有许多杂质，BCA法对蛋白溶液所处环境要求特别高，有金属离子、pH不合适都会有很大影响，所以一般是用来做蛋白提纯后的浓度测定滴~
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亦余心之所善兮虽九死其犹未悔
8楼2012-03-01 10:03:21
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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧
引用回帖:
楼: Originally posted by colorfulmiao at 2012-03-01 10:03:21:
考马斯测浓度是根据标准蛋白的颜色来的吧楼主，既然这样肯定是与分子量有很大关系的，我也在纠结蛋白浓度的问题，但是现在最准确的方法也是用标准蛋白做基准测浓度，没办法固定到说能测到你的多肽或蛋白的准确浓度 ...

谢谢，决定用总氮了，分光光度法测定总氮，用考马斯却是不太靠谱。
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研究僧
9楼2012-03-01 12:03:26
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liying90122

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by alqfren at 2012-03-01 12:03:26
谢谢，决定用总氮了，分光光度法测定总氮，用考马斯却是不太靠谱。...

想请教一下您分光光度法测定总氮具体的方法是什么，谢谢啦
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做好实验，等待毕业。
10楼2018-10-23 09:46:56
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