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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧

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[交流] 考马斯亮蓝测定蛋白的结果受蛋白的分子量大小的影响吗？已有7人参与

研究表明，考马斯亮蓝测蛋白的主要机理是，考马斯亮蓝能够与蛋白中的碱性氨基酸结合，那么我想问测定结果是否受蛋白的分量的影响？比如说蛋白经过一定程度的水解，原始蛋白与不同水解程度的蛋白、完全水解后的氨基酸溶液是否一致？分子量超大的蛋白，是否会因为其复杂的结构，考马斯亮蓝无法与藏在蛋白内部的碱性氨基酸结合而结果偏低？如果测定结果受分子量的影响的话，是不是说所测蛋白的分子量必须某个该范围内，比如说在牛血清蛋白分子量（所采用的的标准物质，68kDa）上下多少范围内，才能够采用该方法定量测定？如果不是在这个特定的范围内，是不是所得蛋白的含量只能是相对的，只能在同一种测定方法，同一种测定目标之间进行比较，比如说啤酒，采用BCA或者Lowry与此方法所得结果之间没有可比性，而同样采用考马斯亮蓝法测定的啤酒和麦汁中蛋白的结果间也不具有可比性？
实际上，我只是想测多肽含量，参照大豆肽粉的行业标准，但是不想用凯氏定氮，想用一种更便捷的测定多肽和游离氨基酸总量的方法，然后再扣除游离氨基酸的含量。如果说考马斯亮蓝法只是无法测定游离氨基酸的量，那么我就可以直接用这种方法测定了，如果说某个分子量一下的多肽都测不出来，比如说2KDa，我就不能用这种方法。
有一篇文献里测多肽也是用的这种方法，可是想想又有诸多不妥。
想了这么多，考马斯亮蓝这种方法，好像不是一种十分精确的方法，需要探讨的东西很多？
问问各位大中小牛们，你们有没有过这样的想法或做过类似的试验？

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